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wttsjzs

铁虫 (初入文坛)

[求助] 国标16886.5细胞毒性试验相关问题请教！ 已有1人参与

刚接触这个实验，有好几个问题不明白：
1.阳性对照是1%ZDEC（二乙基二硫代氨基甲酸锌），用MEM+10%FBS+1%双抗配制，发现不溶，这个怎么配制呢？能否过滤除菌？阴性对照高密度聚乙烯买的是粉末状的，该怎么配制呢？是否需要买片状的浸提？如果浸提的话，是否可以反复浸提使用呢？
2.材料浸提的时间怎么确定呢？如何选24h 48h 72h？浸提后浸提液加到细胞里继续培养，培养的时间怎么确定呢？我看到国标里有24h和72h，怎么选择呢？
3.国标里写加入MTT后2h即可，但是我看到其他的试验都是推荐加4h，这个有何影响？
请教了！
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1楼 2018-11-29 16:06:56
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wttsjzs

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 默默然呢 at 2018-11-29 17:31:39
阳性对照一直用的DMSO，阴性对照一般都是用片材按面积浸提，粉末的话可以考虑按重量浸提，浸提时间没有特殊要求通常选用37℃浸提72h，加入浸提液后继续培养24h，MTT培养时间为4h。

阳性对照DMSO用的浓度是多少呢？阴性对照片材你们是重复使用的吗？怎么清洗灭菌呢？我看到高密度聚乙烯片太贵了。关于浸提和MTT，国标16886.5明确写出是浸提24h,MTT是2h，改变条件的话是不是需要做验证试验证明？
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3楼2018-11-30 13:54:09
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默默然呢

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wttsjzs: 金币+5, ★★★很有帮助 2018-11-30 15:08:54
阳性对照一直用的DMSO，阴性对照一般都是用片材按面积浸提，粉末的话可以考虑按重量浸提，浸提时间没有特殊要求通常选用37℃浸提72h，加入浸提液后继续培养24h，MTT培养时间为4h。
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2楼2018-11-29 17:31:39
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默默然呢

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wttsjzs at 2018-11-30 13:54:09
阳性对照DMSO用的浓度是多少呢？阴性对照片材你们是重复使用的吗？怎么清洗灭菌呢？我看到高密度聚乙烯片太贵了。关于浸提和MTT，国标16886.5明确写出是浸提24h,MTT是2h，改变条件的话是不是需要做验证试验证明？...

DMSO浓度为10%，阴性对照我们是重复使用的，超声清洗后湿热灭菌，浸提时间标准里应该写的是不少于24h，浸提72h及MTT培养4h是权威机构推荐使用的时间，不需要验证，延长反应时间是为了反应更完全吧。
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4楼2018-11-30 14:43:03
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wttsjzs

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 默默然呢 at 2018-11-30 14:43:03
DMSO浓度为10%，阴性对照我们是重复使用的，超声清洗后湿热灭菌，浸提时间标准里应该写的是不少于24h，浸提72h及MTT培养4h是权威机构推荐使用的时间，不需要验证，延长反应时间是为了反应更完全吧。...

请问你们阴性对照高密度聚乙烯是在哪里买的呢？
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5楼2018-11-30 15:07:55
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