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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶切回收问题
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神秘园

金虫 (初入文坛)

[交流] 酶切回收问题

请问各位，我做酶切之后能不能50℃加热使酶失活，然后直接用于后续试验？我后面还要做连接可不可以？
我的回收效率太低了。。。不知道是不是我操作的问题，用的天泽的试剂盒~
回收时有啥需要注意的各位也可以给我建议一下~谢了~
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1楼 2009-04-21 08:22:19
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anik

银虫 (正式写手)
★
sutao1979(金币+1,VIP+0):thank you for participation 4-21 15:01
可以不用灭活直接用于后续试验，但如果你不放心的话可以热激灭活。
回收效率低，一直是个比较头疼的问题。这里面每个步骤不一定非按照他的说明书上来做，可以根据你自身的具体情况来定。
我以前是用玻璃奶回收的，效果比试剂盒要好，而且速度也不比试剂盒来的慢。
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2楼2009-04-21 08:28:22
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神秘园

金虫 (初入文坛)
谢谢ls~继续坐等其他高手的解答~嘿嘿~
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3楼2009-04-21 08:39:33
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
sutao1979(金币+1,VIP+0):thank you 4-21 15:01
国产试剂盒回收率就是低
灭活之后，如果连接体系中，酶切产物的体积比较大，还是会影响连接的
你可以考虑进口的试剂盒嘛……
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4楼2009-04-21 08:44:32
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神秘园

金虫 (初入文坛)
5.4kb质粒，单酶切~大么？
进口的？穷学校，米钱。。。
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5楼2009-04-21 08:58:25
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
不回收灭活直接做后续试验没试过。
回收的一些小细节：
1，TAE新配，回收胶现做现用。（电泳缓冲液当然也应该是新的了）
2，切胶尽量切掉没有亮带的部分可以提高回收率。（可尽量把胶做厚，点样孔做窄，这样容易切掉没亮带部分）
3，最后加洗脱液可以将洗脱液体积减小，重复洗脱一次也可加大回收率。
4，不要用台式离心机，用好点的离心机，转速和时间控制上会准确点。
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Thank-you，so-blue.
6楼2009-04-21 09:41:25
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神秘园

金虫 (初入文坛)
好的，谢谢ls~
我不只PCR回收，就连质粒酶切回收效率也不高
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7楼2009-04-21 09:44:28
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菊花茶

木虫 (著名写手)
占个位置，学习学习
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8楼2009-04-21 09:47:11
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buffoon_1985

银虫 (小有名气)
共同学习~
我是lz，换回自己号啦~
刚刚自己电脑不能上网。。。
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9楼2009-04-21 09:52:04
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