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神秘园

金虫 (初入文坛)

[交流] 酶切回收问题

请问各位,我做酶切之后能不能50℃加热使酶失活,然后直接用于后续试验?我后面还要做连接可不可以?
我的回收效率太低了。。。不知道是不是我操作的问题,用的天泽的试剂盒~
回收时有啥需要注意的各位也可以给我建议一下~谢了~
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anik

银虫 (正式写手)


sutao1979(金币+1,VIP+0):thank you for participation 4-21 15:01
可以不用灭活直接用于后续试验,但如果你不放心的话可以热激灭活。
回收效率低,一直是个比较头疼的问题。这里面每个步骤不一定非按照他的说明书上来做,可以根据你自身的具体情况来定。
我以前是用玻璃奶回收的,效果比试剂盒要好,而且速度也不比试剂盒来的慢。
2楼2009-04-21 08:28:22
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神秘园

金虫 (初入文坛)

谢谢ls~继续坐等其他高手的解答~嘿嘿~
3楼2009-04-21 08:39:33
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


sutao1979(金币+1,VIP+0):thank you 4-21 15:01
国产试剂盒回收率就是低
灭活之后,如果连接体系中,酶切产物的体积比较大,还是会影响连接的
你可以考虑进口的试剂盒嘛……
4楼2009-04-21 08:44:32
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神秘园

金虫 (初入文坛)

5.4kb质粒,单酶切~大么?
进口的?穷学校,米钱。。。
5楼2009-04-21 08:58:25
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

不回收灭活直接做后续试验没试过。
回收的一些小细节:
1,TAE新配,回收胶现做现用。(电泳缓冲液当然也应该是新的了)
2,切胶尽量切掉没有亮带的部分可以提高回收率。(可尽量把胶做厚,点样孔做窄,这样容易切掉没亮带部分)
3,最后加洗脱液可以将洗脱液体积减小,重复洗脱一次也可加大回收率。
4,不要用台式离心机,用好点的离心机,转速和时间控制上会准确点。
Thank-you,so-blue.
6楼2009-04-21 09:41:25
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神秘园

金虫 (初入文坛)

好的,谢谢ls~
我不只PCR回收,就连质粒酶切回收效率也不高
7楼2009-04-21 09:44:28
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菊花茶

木虫 (著名写手)

占个位置,学习学习
8楼2009-04-21 09:47:11
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buffoon_1985

银虫 (小有名气)

共同学习~
我是lz,换回自己号啦~
刚刚自己电脑不能上网。。。
9楼2009-04-21 09:52:04
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