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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hxp207

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助】IgG 浓度的测定(已解决)

我在sigma买的human IgG,powder。老板让测一下它的浓度。
我用醋酸钠溶液重构成1mg/ml的溶液,说明书中说是E(280,1%)=14,即在280nm的波长下消光系数为14,我测得的浓度却为0.1mg/ml,稀释成50ug/ml 的IgG测得的浓度为5ug/ml,不明白为什么总是差10倍。
我用的仪器是岛津公司的biospec-mini分光光度仪。
请有经验的同学指教,谢谢!

[ Last edited by hxp207 on 2009-5-26 at 03:14 ]
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yinmin9521

铁杆木虫 (著名写手)


hxp207(金币+1,VIP+0):加蛋白肯定不行吧,加进去的误差会远远大于容器吸附的误差 4-21 01:13
是不是被容器壁吸附了?往里面加点其它蛋白竞争吸附行不行?
5楼2009-04-20 08:42:46
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wgcui

铁杆木虫 (著名写手)


yusen_1982(金币+0,VIP+0):欢迎讨论 4-15 10:52
hxp207(金币+1,VIP+0):能说具体些么,会不会在操作过程中哪个参数不对?谢谢。 4-15 10:59
做个标准线看看。
2楼2009-04-15 08:34:54
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yzhuang

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
yusen_1982(金币+1,VIP+0):欢迎应助 4-17 00:05
hxp207(金币+2,VIP+0):谢谢你的解答,由于仪器基本都是自动的,软件有专门测蛋白浓度的功能,我只需要输入波长280,消光系数14,软件就能计算出蛋白浓度。 4-17 11:48
低浓度蛋白溶液由于容器吸附的原因,通常存在较大的误差。另外,UV280法对大多数蛋白的检测限为100ug/ml。

如果能将操作过程及计算方法写出来,会有助于大家从各方面帮忙找找原因。
3楼2009-04-16 23:47:14
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

★ ★
hxp207(金币+2,VIP+0):我倒没有迷信机器的能力,关键是老板非让做个浓度,我只能照做了,另外,因为我要把IgG修饰要一个基底表面,所以浓度还是很重要的,谢谢你的回答 4-19 02:27
对于较低浓度和较高浓度的蛋白,用280nm吸收测定的并不准确。实际上没有很好的办法精确测定低浓度的蛋白浓度。
我曾经做过BSA的浓度梯度的280nm光吸收的标准曲线,在100ug/ml-1mg/ml的测定相对可信,超出范围后就不是线性关系。楼主有点迷信机器的能力了。
给的是粉末,那就可以直接按照比例溶解,根本不必要测定浓度,稀释就好了。生物实验对这种东西要求没有那么严=。=
For my life!
4楼2009-04-18 22:07:36
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