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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 综合其他 » 【求助】IgG 浓度的测定(已解决)
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hxp207

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助】IgG 浓度的测定(已解决)

我在sigma买的human IgG，powder。老板让测一下它的浓度。
我用醋酸钠溶液重构成1mg/ml的溶液，说明书中说是E（280，1%）=14，即在280nm的波长下消光系数为14，我测得的浓度却为0.1mg/ml,稀释成50ug/ml 的IgG测得的浓度为5ug/ml，不明白为什么总是差10倍。
我用的仪器是岛津公司的biospec-mini分光光度仪。
请有经验的同学指教，谢谢！

[ Last edited by hxp207 on 2009-5-26 at 03:14 ]
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1楼 2009-04-15 08:15:42
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wgcui

铁杆木虫 (著名写手)
★
yusen_1982(金币+0,VIP+0):欢迎讨论 4-15 10:52
hxp207(金币+1,VIP+0):能说具体些么，会不会在操作过程中哪个参数不对？谢谢。 4-15 10:59
做个标准线看看。
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2楼2009-04-15 08:34:54
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yzhuang

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
yusen_1982(金币+1,VIP+0):欢迎应助 4-17 00:05
hxp207(金币+2,VIP+0):谢谢你的解答，由于仪器基本都是自动的，软件有专门测蛋白浓度的功能，我只需要输入波长280，消光系数14，软件就能计算出蛋白浓度。 4-17 11:48
低浓度蛋白溶液由于容器吸附的原因，通常存在较大的误差。另外，UV280法对大多数蛋白的检测限为100ug/ml。

如果能将操作过程及计算方法写出来，会有助于大家从各方面帮忙找找原因。
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3楼2009-04-16 23:47:14
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
★ ★
hxp207(金币+2,VIP+0):我倒没有迷信机器的能力，关键是老板非让做个浓度，我只能照做了，另外，因为我要把IgG修饰要一个基底表面，所以浓度还是很重要的，谢谢你的回答 4-19 02:27
对于较低浓度和较高浓度的蛋白，用280nm吸收测定的并不准确。实际上没有很好的办法精确测定低浓度的蛋白浓度。
我曾经做过BSA的浓度梯度的280nm光吸收的标准曲线，在100ug/ml-1mg/ml的测定相对可信，超出范围后就不是线性关系。楼主有点迷信机器的能力了。
给的是粉末，那就可以直接按照比例溶解，根本不必要测定浓度，稀释就好了。生物实验对这种东西要求没有那么严=。=
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For my life！
4楼2009-04-18 22:07:36
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yinmin9521

铁杆木虫 (著名写手)
★
hxp207(金币+1,VIP+0):加蛋白肯定不行吧，加进去的误差会远远大于容器吸附的误差 4-21 01:13
是不是被容器壁吸附了？往里面加点其它蛋白竞争吸附行不行？
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5楼2009-04-20 08:42:46
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heismeng

金虫 (小有名气)
★ ★
yusen_1982(金币+1,VIP+0):欢迎应助 4-20 16:49
hxp207(金币+1,VIP+0):这是一个可以考虑的方法，谢谢 4-21 01:12
我看有文献拿ELISA来测IgG E 的浓度
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6楼2009-04-20 12:05:31
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lujun01

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
yusen_1982(金币+1,VIP+0):欢迎讨论 5-25 13:45
薰衣草儿(金币+1,VIP+0):鼓励新虫，再奖！ 5-25 14:31
薰衣草儿(金币+1,VIP+0):谢谢回答，生物材料版期待您更多的参与！ 5-25 14:32
hxp207(金币+1,VIP+0):谢谢 5-26 02:59
楼主,利用消光系数方法,必须把蛋白的浓度放在要求的附近,上下波动不大才准确,你可以通过微量比色皿解决你样品珍贵的问题
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7楼2009-05-25 13:43:07
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