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hxp207木虫 (著名写手)
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[交流]
【求助】IgG 浓度的测定(已解决)
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我在sigma买的human IgG，powder。老板让测一下它的浓度。 我用醋酸钠溶液重构成1mg/ml的溶液，说明书中说是E（280，1%）=14，即在280nm的波长下消光系数为14，我测得的浓度却为0.1mg/ml,稀释成50ug/ml 的IgG测得的浓度为5ug/ml，不明白为什么总是差10倍。 我用的仪器是岛津公司的biospec-mini分光光度仪。 请有经验的同学指教，谢谢！ [ Last edited by hxp207 on 2009-5-26 at 03:14 ] |
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yzhuang
金虫 (小有名气)
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3楼2009-04-16 23:47:14
wgcui
铁杆木虫 (著名写手)
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yusen_1982(金币+0,VIP+0):欢迎讨论 4-15 10:52
hxp207(金币+1,VIP+0):能说具体些么，会不会在操作过程中哪个参数不对？谢谢。 4-15 10:59
yusen_1982(金币+0,VIP+0):欢迎讨论 4-15 10:52
hxp207(金币+1,VIP+0):能说具体些么，会不会在操作过程中哪个参数不对？谢谢。 4-15 10:59
| 做个标准线看看。 |
2楼2009-04-15 08:34:54
winter_gates
金虫 (正式写手)
生命过客
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hxp207(金币+2,VIP+0):我倒没有迷信机器的能力，关键是老板非让做个浓度，我只能照做了，另外，因为我要把IgG修饰要一个基底表面，所以浓度还是很重要的，谢谢你的回答 4-19 02:27
hxp207(金币+2,VIP+0):我倒没有迷信机器的能力，关键是老板非让做个浓度，我只能照做了，另外，因为我要把IgG修饰要一个基底表面，所以浓度还是很重要的，谢谢你的回答 4-19 02:27
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对于较低浓度和较高浓度的蛋白，用280nm吸收测定的并不准确。实际上没有很好的办法精确测定低浓度的蛋白浓度。 我曾经做过BSA的浓度梯度的280nm光吸收的标准曲线，在100ug/ml-1mg/ml的测定相对可信，超出范围后就不是线性关系。楼主有点迷信机器的能力了。 给的是粉末，那就可以直接按照比例溶解，根本不必要测定浓度，稀释就好了。生物实验对这种东西要求没有那么严=。= |
4楼2009-04-18 22:07:36
yinmin9521
铁杆木虫 (著名写手)
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5楼2009-04-20 08:42:46
