应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » COIP实验求教
51/1返回列表
查看: 2497  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] COIP实验求教 已有1人参与

做两个蛋白在体内互作co-IP实验，A能拉下B，但B拉不下A，是怎么回事呢？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-11-02 17:14:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梅雪芳

新虫 (小有名气)
同样在做COIP，个人认为你只要一个方向拉下来就行了吧？反方向会不会是因为B所结合的其他蛋白成分比较多，掩盖了A成分？

我们这边想做某个杂蛋白ESP与细胞中的蛋白DNMT/TET的相互作用，想知道这个杂蛋白ESP中的哪些成分能与细胞中的蛋白DNMT/TET相互作用，用COIP-MS的方法。
      目前的做法是，做了杂蛋白ESP的多克隆抗体（兔IgG），买了蛋白DNMT/TET的商品化抗体。将杂蛋白ESP与细胞作用48h后，做coip。洗脱后，用杂蛋白ESP的多克隆抗体做WB验证，发现没有特异性条带，也就是没拉下来，但是其他的实验又间接证明他们之间应该有关系。
   
请问这种情况会是什么问题呢？原代细胞？杂蛋白多抗的问题？蛋白与细胞作用时间太长了？
    还是说根本就没有结合？
    这种情况有没有什么解决方案，或者应该用什么方法验证一下呢？
    以下是两次COIP的结果，没有看到特异性条带
赞一下 回复此楼
3楼2018-11-19 22:57:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
自己顶一个

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
2楼2018-11-05 07:57:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幽幽深谷竹

金虫 (著名写手)

骨子里是文科男的理科男

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
weizhi111: 金币+8, ★★★很有帮助 2018-12-13 08:34:49
这个其实很常见的。最好的结果是互相都能拉下来。然而实际情况是正调可以，反调不行。这可能是因为两个蛋白表达丰度不同，导致拉下来蛋白的能力不同。建议最好做过表达后的COIP，或者COip之后打质谱做分析，这样更准确
赞一下(1人) 回复此楼
我就是我IamwhatIam
4楼2018-12-12 22:05:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 幽幽深谷竹 at 2018-12-12 22:05:13
这个其实很常见的。最好的结果是互相都能拉下来。然而实际情况是正调可以，反调不行。这可能是因为两个蛋白表达丰度不同，导致拉下来蛋白的能力不同。建议最好做过表达后的COIP，或者COip之后打质谱做分析，这样更准 ...

想问一下，如果要拉下来的蛋白是未知的，那打质谱后，怎么分析是哪个蛋白呢？质谱结果分析，是不是挺难得啊，后面我也要做coip，检测的是未知蛋白。
赞一下 回复此楼
nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
5楼2019-01-03 11:21:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 265求调剂 +10 梁梁校校 2026-03-17 10/500 2026-03-23 21:17 by 一切OK
[考研] 070300化学求调剂 +8 苑豆豆 2026-03-20 8/400 2026-03-23 20:57 by baobaoye
[考研] 316求调剂 +7 梁茜雯 2026-03-19 7/350 2026-03-23 16:21 by lingjue
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +8 tcxiaoxx 2026-03-20 9/450 2026-03-23 12:16 by tcxiaoxx
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +3 Jack?k?y 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:17 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂（有工作经验） +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭