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weizhi111至尊木虫 (正式写手)
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COIP实验求教 已有1人参与
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做两个蛋白在体内互作co-IP实验，A能拉下B，但B拉不下A，是怎么回事呢？ 发自小木虫IOS客户端 |
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weizhi111
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2楼2018-11-05 07:57:37
梅雪芳
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同样在做COIP，个人认为你只要一个方向拉下来就行了吧？反方向会不会是因为B所结合的其他蛋白成分比较多，掩盖了A成分？ 我们这边想做某个杂蛋白ESP与细胞中的蛋白DNMT/TET的相互作用，想知道这个杂蛋白ESP中的哪些成分能与细胞中的蛋白DNMT/TET相互作用，用COIP-MS的方法。 目前的做法是，做了杂蛋白ESP的多克隆抗体（兔IgG），买了蛋白DNMT/TET的商品化抗体。将杂蛋白ESP与细胞作用48h后，做coip。洗脱后，用杂蛋白ESP的多克隆抗体做WB验证，发现没有特异性条带，也就是没拉下来，但是其他的实验又间接证明他们之间应该有关系。 请问这种情况会是什么问题呢？原代细胞？杂蛋白多抗的问题？蛋白与细胞作用时间太长了？ 还是说根本就没有结合？ 这种情况有没有什么解决方案，或者应该用什么方法验证一下呢？ 以下是两次COIP的结果，没有看到特异性条带 |
3楼2018-11-19 22:57:38
4楼2018-12-12 22:05:13
prthefu
木虫 (著名写手)
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5楼2019-01-03 11:21:58