应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » COIP实验求教
51/1返回列表
查看: 2490  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] COIP实验求教 已有1人参与

做两个蛋白在体内互作co-IP实验，A能拉下B，但B拉不下A，是怎么回事呢？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-11-02 17:14:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
自己顶一个

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
2楼2018-11-05 07:57:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梅雪芳

新虫 (小有名气)
同样在做COIP，个人认为你只要一个方向拉下来就行了吧？反方向会不会是因为B所结合的其他蛋白成分比较多，掩盖了A成分？

我们这边想做某个杂蛋白ESP与细胞中的蛋白DNMT/TET的相互作用，想知道这个杂蛋白ESP中的哪些成分能与细胞中的蛋白DNMT/TET相互作用，用COIP-MS的方法。
      目前的做法是，做了杂蛋白ESP的多克隆抗体（兔IgG），买了蛋白DNMT/TET的商品化抗体。将杂蛋白ESP与细胞作用48h后，做coip。洗脱后，用杂蛋白ESP的多克隆抗体做WB验证，发现没有特异性条带，也就是没拉下来，但是其他的实验又间接证明他们之间应该有关系。
   
请问这种情况会是什么问题呢？原代细胞？杂蛋白多抗的问题？蛋白与细胞作用时间太长了？
    还是说根本就没有结合？
    这种情况有没有什么解决方案，或者应该用什么方法验证一下呢？
    以下是两次COIP的结果，没有看到特异性条带
赞一下 回复此楼
3楼2018-11-19 22:57:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幽幽深谷竹

金虫 (著名写手)

骨子里是文科男的理科男

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
weizhi111: 金币+8, ★★★很有帮助 2018-12-13 08:34:49
这个其实很常见的。最好的结果是互相都能拉下来。然而实际情况是正调可以，反调不行。这可能是因为两个蛋白表达丰度不同，导致拉下来蛋白的能力不同。建议最好做过表达后的COIP，或者COip之后打质谱做分析，这样更准确
赞一下(1人) 回复此楼
我就是我IamwhatIam
4楼2018-12-12 22:05:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 幽幽深谷竹 at 2018-12-12 22:05:13
这个其实很常见的。最好的结果是互相都能拉下来。然而实际情况是正调可以，反调不行。这可能是因为两个蛋白表达丰度不同，导致拉下来蛋白的能力不同。建议最好做过表达后的COIP，或者COip之后打质谱做分析，这样更准 ...

想问一下，如果要拉下来的蛋白是未知的，那打质谱后，怎么分析是哪个蛋白呢？质谱结果分析，是不是挺难得啊，后面我也要做coip，检测的是未知蛋白。
赞一下 回复此楼
nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
5楼2019-01-03 11:21:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weizhi111 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +3 恒顺自然 2026-03-02 3/150 2026-03-02 18:49 by L135790
[考研] 284求调剂 +5 天下熯 2026-03-02 5/250 2026-03-02 18:38 by caszguilin
[考研] 清华大学 材料与化工 353分求调剂 +4 awaystay 2026-03-02 5/250 2026-03-02 17:33 by yeahyou
[考研] 一志愿东北大学材料专硕328，求调剂 +3 shs1083 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:27 by houyaoxu
[考研] 0856化工专硕求调剂 +15 董boxing 2026-03-01 15/750 2026-03-02 15:06 by 晃晃不许晃
[考研] 303求调剂 +5 今夏不夏 2026-03-01 5/250 2026-03-02 15:01 by 向上的胖东
[考研] 290分材料工程085601求调剂 数二英一 +3 llx0610 2026-03-02 3/150 2026-03-02 14:15 by yc258
[考博] 诚招农业博士 +3 心欣向荣 2026-02-28 3/150 2026-03-02 13:33 by 时间不狗
[考研] 材料学硕318求调剂 +9 February_Feb 2026-03-01 9/450 2026-03-02 13:31 by njzyff
[考研] 哈工大计算机刘劼团队招生 +4 hit_aiot 2026-03-01 6/300 2026-03-02 11:53 by 一声问好
[考研] 281求调剂 +5 2026计算机_诚心 2026-03-01 8/400 2026-03-02 11:05 by 汪！？！
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +6 wsl111 2026-03-01 6/300 2026-03-02 11:00 by ydudjddnd
[考研] 材料学调剂 +10 提神豆沙包 2026-02-28 12/600 2026-03-02 09:26 by 李老师！
[考研] 材料工程269求调剂 +3 白刺玫 2026-03-02 3/150 2026-03-02 09:25 by 一休哥FU
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭