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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » T4-DNA连接酶使用体系
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关Q想毕业

新虫 (小有名气)

[求助] T4-DNA连接酶使用体系 已有1人参与

请问下使用过T4-DNA连接酶的朋友们，你们的反应体系是怎样的啊？还有载体长度和目的片段长度都是多长呀？
我自己的载体片段是5000多，目的片段2000，双酶切验证的时候，载体片段很亮，但是目的片段只能看见非常非常浅的一条带，反应体系是4°过夜连接，两个片段各2μl，T4-DNA连接酶1μl，buffer1μl，水4μl，有大神知道是什么原因吗？感谢！

@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2018-10-06 18:07:11
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niil

金虫 (正式写手)
★
关Q想毕业(渊博震天代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-07 19:55:46
你的反应体系里目标片段数量太少了。载体片段：目标片段在1:4~1:10之间比较合适。

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Stop fighting,let it flow.
2楼2018-10-06 19:42:25
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白话八股

金虫 (正式写手)
哪家的T4？4度连接过夜？

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最爱的那个人会出现在身边。
3楼2018-10-06 22:51:04
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macgray11

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
关Q想毕业(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-10-07 19:55:36
本帖内容被屏蔽
4楼2018-10-07 08:57:34
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关Q想毕业

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 白话八股 at 2018-10-06 22:51:04
哪家的T4？4度连接过夜？

takara的吧好像是，我看我们实验室的都是4°过夜连接的，所以也用了这个方法

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5楼2018-10-07 11:33:30
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关Q想毕业

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by niil at 2018-10-06 19:42:25
你的反应体系里目标片段数量太少了。载体片段：目标片段在1:4~1:10之间比较合适。

哦哦，这样的啊，十分感谢，我去试试

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6楼2018-10-07 11:33:58
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关Q想毕业

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by macgray11 at 2018-10-07 08:57:34
建议扩大反应体系，同时尝试22度1小时，就可以了，无需过夜的

嗯嗯，我看那个说明书上也是这么写得，但是因为实验室的师姐之前都是这么做的所以也跟着这么做了，我去试试您说的，感谢回复

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7楼2018-10-07 11:36:29
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白话八股

金虫 (正式写手)
★ ★
关Q想毕业(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-10-07 19:55:21
通常是16或者22，前段:载体的摩尔比控制在3:1-10:1

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最爱的那个人会出现在身边。
8楼2018-10-07 14:42:43
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白话八股

金虫 (正式写手)
多说一句，听实验室其他人讲，不如安心把说明书找来仔细阅读。

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最爱的那个人会出现在身边。
9楼2018-10-07 14:43:43
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关Q想毕业

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 白话八股 at 2018-10-07 14:43:43
多说一句，听实验室其他人讲，不如安心把说明书找来仔细阅读。

嗯嗯，感谢您的指导，我已经准备重新按照说明书调整体系了，非常感谢

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10楼2018-10-07 19:37:37
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