应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » T4-DNA连接酶使用体系
101/1返回列表
查看: 12971  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

关Q想毕业

新虫 (小有名气)

[求助] T4-DNA连接酶使用体系 已有1人参与

请问下使用过T4-DNA连接酶的朋友们，你们的反应体系是怎样的啊？还有载体长度和目的片段长度都是多长呀？
我自己的载体片段是5000多，目的片段2000，双酶切验证的时候，载体片段很亮，但是目的片段只能看见非常非常浅的一条带，反应体系是4°过夜连接，两个片段各2μl，T4-DNA连接酶1μl，buffer1μl，水4μl，有大神知道是什么原因吗？感谢！

@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-10-06 18:07:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

niil

金虫 (正式写手)
★
关Q想毕业(渊博震天代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-07 19:55:46
你的反应体系里目标片段数量太少了。载体片段：目标片段在1:4~1:10之间比较合适。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
Stop fighting,let it flow.
2楼2018-10-06 19:42:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白话八股

金虫 (正式写手)
哪家的T4？4度连接过夜？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
最爱的那个人会出现在身边。
3楼2018-10-06 22:51:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

macgray11

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
关Q想毕业(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-10-07 19:55:36
本帖内容被屏蔽
4楼2018-10-07 08:57:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

关Q想毕业

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 白话八股 at 2018-10-06 22:51:04
哪家的T4？4度连接过夜？

takara的吧好像是，我看我们实验室的都是4°过夜连接的，所以也用了这个方法

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2018-10-07 11:33:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

关Q想毕业

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by niil at 2018-10-06 19:42:25
你的反应体系里目标片段数量太少了。载体片段：目标片段在1:4~1:10之间比较合适。

哦哦，这样的啊，十分感谢，我去试试

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2018-10-07 11:33:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

关Q想毕业

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by macgray11 at 2018-10-07 08:57:34
建议扩大反应体系，同时尝试22度1小时，就可以了，无需过夜的

嗯嗯，我看那个说明书上也是这么写得，但是因为实验室的师姐之前都是这么做的所以也跟着这么做了，我去试试您说的，感谢回复

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2018-10-07 11:36:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白话八股

金虫 (正式写手)
★ ★
关Q想毕业(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-10-07 19:55:21
通常是16或者22，前段:载体的摩尔比控制在3:1-10:1

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
最爱的那个人会出现在身边。
8楼2018-10-07 14:42:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白话八股

金虫 (正式写手)
多说一句，听实验室其他人讲，不如安心把说明书找来仔细阅读。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
最爱的那个人会出现在身边。
9楼2018-10-07 14:43:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

关Q想毕业

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 白话八股 at 2018-10-07 14:43:43
多说一句，听实验室其他人讲，不如安心把说明书找来仔细阅读。

嗯嗯，感谢您的指导，我已经准备重新按照说明书调整体系了，非常感谢

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
10楼2018-10-07 19:37:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 关Q想毕业 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 l7k6xnh0yc 2026-05-14 4/200 2026-05-15 17:43 by x0mp7owy2b
[教师之家] 上海大学实验技术岗位非升即走 +3 嘻嘻哈哈乐呵呵 2026-05-15 3/150 2026-05-15 15:40 by 187385hgh
[论文投稿] 有带发论文的吗 +4 山楂之术 2026-05-09 4/200 2026-05-15 15:40 by 妹子不好惹
[文学芳草园] 风把牡丹吹跑了 +5 myrtle 2026-05-12 9/450 2026-05-15 15:27 by myrtle
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 l7k6xnh0yc 2026-05-14 3/150 2026-05-15 12:03 by onwj4wpxp2
[基金申请] 精华III:  评审感受-评审感受-评审感受 +14 ferrarichen 2026-05-11 18/900 2026-05-15 11:12 by cmhchen
[基金申请] 这年头没有找到涵评专家，还有中面上的可能吗 +9 dd921ww 2026-05-12 10/500 2026-05-15 10:41 by muyiliuhui
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 l7k6xnh0yc 2026-05-14 3/150 2026-05-15 09:23 by onwj4wpxp2
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cjf4bx70cj 2026-05-14 4/200 2026-05-15 09:03 by gagyerk94e
[教师之家] 教学课件你会给同学吗 +8 硕士研究生吗 2026-05-13 8/400 2026-05-14 22:23 by 常规沥青
[考博] 26应届毕业生考博求助 +3 wo一定上岸 2026-05-13 3/150 2026-05-14 21:47 by 明海天涯
[基金申请] 重磅！青年科学基金项目（C类）资助增幅预计超过50% +5 水和泥不是水泥 2026-05-13 7/350 2026-05-14 20:57 by 水和泥不是水泥
[有机交流] 求助2，4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法 20+3 光吃不拉 2026-05-14 5/250 2026-05-14 20:15 by 一切都是空工
[考博] 申博自荐 +4 食品的橙子 2026-05-09 6/300 2026-05-14 16:05 by great1919
[考博] 材料类只有一篇综述能申博么 +4 乐逍遥谷 2026-05-13 4/200 2026-05-14 12:05 by zhyzzh
[基金申请] 请问大佬b0816评完了吗 +3 市民华南虎 2026-05-12 7/350 2026-05-14 07:41 by 市民华南虎
[硕博家园] 导师各种操作恶心咋办 +11 苍白的小青天 2026-05-09 13/650 2026-05-13 17:11 by 六两废铜
[论文投稿] 求助大佬sci投稿哪个好中 +3 江沅188 2026-05-12 4/200 2026-05-13 14:35 by 江沅188
[文学芳草园] 窗边初夏的小雨 +7 阿美_Lml888 2026-05-09 10/500 2026-05-12 15:27 by 阿美_Lml888
[考博] 现在不知道怎么办，感觉很痛苦 +4 qweww 2026-05-11 5/250 2026-05-11 20:23 by Oversize
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭