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关Q想毕业

新虫 (小有名气)

[求助] T4-DNA连接酶使用体系 已有1人参与

请问下使用过T4-DNA连接酶的朋友们,你们的反应体系是怎样的啊?还有载体长度和目的片段长度都是多长呀?
我自己的载体片段是5000多,目的片段2000,双酶切验证的时候,载体片段很亮,但是目的片段只能看见非常非常浅的一条带,反应体系是4°过夜连接,两个片段各2μl,T4-DNA连接酶1μl,buffer1μl,水4μl,有大神知道是什么原因吗?感谢!

@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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关Q想毕业

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by macgray11 at 2018-10-07 08:57:34
建议扩大反应体系,同时尝试22度1小时,就可以了,无需过夜的

嗯嗯,我看那个说明书上也是这么写得,但是因为实验室的师姐之前都是这么做的所以也跟着这么做了,我去试试您说的,感谢回复

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7楼2018-10-07 11:36:29
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niil

金虫 (正式写手)


关Q想毕业(渊博震天代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-07 19:55:46
你的反应体系里目标片段数量太少了。载体片段:目标片段在1:4~1:10之间比较合适。

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Stop fighting,let it flow.
2楼2018-10-06 19:42:25
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白话八股

金虫 (正式写手)

哪家的T4?4度连接过夜?

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最爱的那个人会出现在身边。
3楼2018-10-06 22:51:04
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macgray11

禁虫 (小有名气)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
关Q想毕业(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-10-07 19:55:36
本帖内容被屏蔽

4楼2018-10-07 08:57:34
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