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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 细胞转染siRNA后western检测蛋白没变化
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包包大包子

新虫 (初入文坛)
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细胞转染siRNA后western检测蛋白没变化
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细胞转染siRNA后转录水平上沉默基因下调明显，基本和对照组比能下调到0.2 但蛋白水平上western检测不出来蛋白表达下调，和对照组的蛋白一样亮，刚开始觉得可能是48h收细胞蛋白表达时间没到，后来72h收细胞做western还是没变化，目前找不到原因。求助大家，谢谢。

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1楼 2018-10-01 00:34:31
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ChengZQ

新虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
弱弱的问下NC阴性对照组的序列怎么设计

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10楼2018-10-01 00:45:58
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包包大包子

新虫 (初入文坛)
公司会给你设计的

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11楼2018-10-01 00:46:47
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谈大炮

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
就是设计的不好使

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12楼2018-10-01 01:32:22
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谈大炮

金虫 (著名写手)
一样一样的问题，还指望着这个毕业呢，无望了

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13楼2018-10-01 01:32:46
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包包大包子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 谈大炮 at 2018-10-01 01:32:46
一样一样的问题，还指望着这个毕业呢，无望了

转录水平下调明显的，western曝光条带都特别亮没差异。和actin
一样特别好曝光

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14楼2018-10-01 01:36:32
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rohdy

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
抗体是否有问题，可能看到的条带不是目的条带

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15楼2018-10-01 07:16:45
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包包大包子

新虫 (初入文坛)
蛋白位置看应该就是这个蛋白

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16楼2018-10-01 09:03:41
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
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有几种可能。1.这个蛋白不需要很高的mRNA水平 2.这个蛋白非常稳定，生产出来不降解。
为什么不敲除呢？
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17楼2018-10-01 10:19:13
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hehelmd

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
重新换家公司抗体，最好查下有没有文献报道过且验证过的抗体。如果没有，过表达一个，验证一下是不是可以识别。如果可以，考虑重新设计sirna

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18楼2018-10-01 11:22:38
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ChengZQ2楼
2018-10-01 00:35   回复  
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b5c1697873楼
2018-10-01 00:35   回复  
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hdchina20104楼
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pgx5692055楼
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盐津梅李6楼
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dxi3987237楼
2018-10-01 00:36   回复  
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28n0891148楼
2018-10-01 00:36   回复  
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cx23347849楼
2018-10-01 00:36   回复  
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