24小时热门版块排行榜    

查看: 1126  |  回复: 10
当前主题已经存档。

206206206206

新虫 (正式写手)

[交流] 考马斯亮蓝测蛋白浓度问题

在用考马斯亮蓝法测超氧化物歧化酶(SOD)的浓度出现问题:
比方说我称20mg的SOD,溶解于pH7.8  25mmol/L Tris-Hcl中然后取一定体积去测蛋白浓度,再通过标曲去计算SOD的重量,计算出来的数字是15-16mg左右,几乎每次都是这样。
重新配制过考马斯亮蓝,重新做标曲,但还是一样差不多就那么个结果!无法理解!
请各位朋友帮忙分析分析,谢谢!

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-5 at 20:11 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanghao2900

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):积极交流奖 4-5 18:39
第一,标准曲线线性相关度高吗?
第二,考马斯亮蓝配置的时候是否经过过滤操作?如果有颗粒悬浮的话,会造成被吸收光的衍射,从而降低吸光值。
2楼2009-04-04 19:34:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)

标曲用的是什么蛋白
3楼2009-04-04 21:47:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

206206206206

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wanghao2900 at 2009-4-4 19:34:
第一,标准曲线线性相关度高吗?
第二,考马斯亮蓝配置的时候是否经过过滤操作?如果有颗粒悬浮的话,会造成被吸收光的衍射,从而降低吸光值。

0.995-0.999不等啊   应该还可以啊!
配制好了我过滤了呀!
4楼2009-04-04 23:45:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

206206206206

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by zhaocy8903 at 2009-4-4 21:47:
标曲用的是什么蛋白

牛血清白蛋白
5楼2009-04-04 23:46:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)


reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖 4-5 18:40
那就很正常了,不同蛋白的吸光度是不一样的
试试LOWRY或BCA法吧
6楼2009-04-05 08:49:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanghao2900

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 206206206206 at 2009-4-4 23:45:

0.995-0.999不等啊   应该还可以啊!
配制好了我过滤了呀!

线性相关度很高啊,你查查考马斯亮蓝的测蛋白的检测限是多少呢?
7楼2009-04-05 22:44:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)

考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色当它与蛋白质通过范德华键结合后变为蓝色且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律可在595nm处比色测定2 5分钟即呈最大光吸收至少稳定1小时该法操作简便迅速消耗样品量少但不同蛋白质之间差异大且标准曲线线性差高浓度的Tris EDTA 尿素甘油蔗糖丙酮硫酸铵和去污剂对测定有干扰缓冲液浓度过高时改变测定液pH值会影响显色考马斯亮蓝染色能力强比色杯不洗干净会影响光吸收值不可用石英杯测定。

不同蛋白质之间差异大
8楼2009-04-06 10:04:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aga0110125

银虫 (小有名气)

考马斯亮蓝检测蛋白很不稳定,我以前做每次结果都不一样
9楼2009-04-07 14:58:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

可以尝试换成BCA法去测
10楼2009-04-07 17:14:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 206206206206 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +8 基诺咪客 2026-08-17 11/550 2026-08-18 17:13 by 悠然熊猫
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +50 医学老男孩 2026-08-13 109/5450 2026-08-18 16:56 by 医学老男孩
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +9 yuleib84 2026-08-18 10/500 2026-08-18 16:52 by archvillain
[教师之家] 两姐妹,一个辛辛苦苦30岁工作当大学教师,另一个23岁就工作当开车教练 +3 瞬息宇宙 2026-08-11 7/350 2026-08-18 16:42 by LNP@mRNA
[基金申请] 明天放榜? +4 Shxjjxjkx 2026-08-18 4/200 2026-08-18 15:59 by abcabc1133
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 8/400 2026-08-18 11:47 by gltch
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
请填处理意见