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新虫 (正式写手)

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虫号: 492025
注册: 2008-01-07
专业: 生物化工

[交流] 考马斯亮蓝测蛋白浓度问题

在用考马斯亮蓝法测超氧化物歧化酶（SOD）的浓度出现问题：
比方说我称20mg的SOD，溶解于pH7.8 25mmol/L Tris-Hcl中然后取一定体积去测蛋白浓度，再通过标曲去计算SOD的重量，计算出来的数字是15-16mg左右，几乎每次都是这样。
重新配制过考马斯亮蓝，重新做标曲，但还是一样差不多就那么个结果！无法理解！
请各位朋友帮忙分析分析，谢谢！

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-5 at 20:11 ]

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1楼 2009-04-04 15:53:20

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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

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虫号: 636507
注册: 2008-10-25
专业: 微生物遗传育种学

考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色当它与蛋白质通过范德华键结合后变为蓝色且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律可在595nm处比色测定2 5分钟即呈最大光吸收至少稳定1小时该法操作简便迅速消耗样品量少但不同蛋白质之间差异大且标准曲线线性差高浓度的Tris EDTA 尿素甘油蔗糖丙酮硫酸铵和去污剂对测定有干扰缓冲液浓度过高时改变测定液pH值会影响显色考马斯亮蓝染色能力强比色杯不洗干净会影响光吸收值不可用石英杯测定。

不同蛋白质之间差异大