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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 考马斯亮蓝测蛋白浓度问题
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206206206206

新虫 (正式写手)

[交流] 考马斯亮蓝测蛋白浓度问题

在用考马斯亮蓝法测超氧化物歧化酶（SOD）的浓度出现问题：
比方说我称20mg的SOD，溶解于pH7.8  25mmol/L Tris-Hcl中然后取一定体积去测蛋白浓度，再通过标曲去计算SOD的重量，计算出来的数字是15-16mg左右，几乎每次都是这样。
重新配制过考马斯亮蓝，重新做标曲，但还是一样差不多就那么个结果！无法理解！
请各位朋友帮忙分析分析，谢谢！

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-5 at 20:11 ]
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1楼 2009-04-04 15:53:20
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wanghao2900

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):积极交流奖 4-5 18:39
第一，标准曲线线性相关度高吗？
第二，考马斯亮蓝配置的时候是否经过过滤操作？如果有颗粒悬浮的话，会造成被吸收光的衍射，从而降低吸光值。
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2楼2009-04-04 19:34:21
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
标曲用的是什么蛋白
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3楼2009-04-04 21:47:28
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206206206206

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wanghao2900 at 2009-4-4 19:34:
第一，标准曲线线性相关度高吗？
第二，考马斯亮蓝配置的时候是否经过过滤操作？如果有颗粒悬浮的话，会造成被吸收光的衍射，从而降低吸光值。

0.995-0.999不等啊   应该还可以啊！
配制好了我过滤了呀！
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4楼2009-04-04 23:45:47
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206206206206

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhaocy8903 at 2009-4-4 21:47:
标曲用的是什么蛋白

牛血清白蛋白
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5楼2009-04-04 23:46:04
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖 4-5 18:40
那就很正常了，不同蛋白的吸光度是不一样的
试试LOWRY或BCA法吧
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6楼2009-04-05 08:49:00
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wanghao2900

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 206206206206 at 2009-4-4 23:45:

0.995-0.999不等啊   应该还可以啊！
配制好了我过滤了呀！

线性相关度很高啊，你查查考马斯亮蓝的测蛋白的检测限是多少呢？
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7楼2009-04-05 22:44:45
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色当它与蛋白质通过范德华键结合后变为蓝色且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律可在595nm处比色测定2 5分钟即呈最大光吸收至少稳定1小时该法操作简便迅速消耗样品量少但不同蛋白质之间差异大且标准曲线线性差高浓度的Tris EDTA 尿素甘油蔗糖丙酮硫酸铵和去污剂对测定有干扰缓冲液浓度过高时改变测定液pH值会影响显色考马斯亮蓝染色能力强比色杯不洗干净会影响光吸收值不可用石英杯测定。

不同蛋白质之间差异大
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8楼2009-04-06 10:04:25
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aga0110125

银虫 (小有名气)
考马斯亮蓝检测蛋白很不稳定，我以前做每次结果都不一样
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9楼2009-04-07 14:58:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
可以尝试换成BCA法去测
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10楼2009-04-07 17:14:27
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