24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1639  |  回复: 7

芥末本绿

金虫 (正式写手)

[交流] 基因双酶切 已有5人参与

PCR得到目的基因,胶回收后进行双酶切反应。30ul酶切体系。
1.胶回收后的浓度跑胶后应该有100ng/ul,双酶切的时候会不会浓度太高切不动?
2.EcoR 1酶切0.5h后就会产生星号活性,我们一般都是过夜切,双酶切以后基因出现多条带,有没有什么办法改进?

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ttrying

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-08-12 08:58:30
检查基因内部是否有相应酶切位点,常用内切酶一般不会把基因切碎的。

发自小木虫Android客户端
2楼2018-08-11 20:18:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

厚德求是

木虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-08-12 08:58:48
PCR产物纯化后跑一下胶,看看是不是引物浓度高了,p出了非特异性条带。

发自小木虫IOS客户端
3楼2018-08-11 22:16:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末本绿

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 厚德求是 at 2018-08-11 22:16:59
PCR产物纯化后跑一下胶,看看是不是引物浓度高了,p出了非特异性条带。

这些都是正常的,我还是考虑星号活性的问题

发自小木虫IOS客户端
4楼2018-08-12 06:58:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末本绿

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ttrying at 2018-08-11 20:18:33
检查基因内部是否有相应酶切位点,常用内切酶一般不会把基因切碎的。

检查过是没有的,设计引物得时候就看了

发自小木虫IOS客户端
5楼2018-08-12 06:58:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Tc148

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
缩短下酶切时间,1到2小时足够,没必要过夜

发自小木虫IOS客户端
6楼2018-08-17 20:43:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清华一只花

禁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

7楼2018-08-18 01:20:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乐乐卡卡西

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你用的哪个公司的酶,我最多切3小时,效果OK的

发自小木虫Android客户端
8楼2018-08-19 14:50:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 芥末本绿 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上本子正文33页,违规吗?会被低分嘛? +5 1234567wang 2026-05-17 6/300 2026-05-17 21:18 by maxjing
[基金申请] 今年审到国自然15份,谈谈感受 +9 国自然国社科中 2026-05-17 9/450 2026-05-17 21:14 by 雪城001
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 cjf4bx70cj 2026-05-14 7/350 2026-05-17 18:49 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 v9tggjlwd0 2026-05-15 5/250 2026-05-17 18:39 by Equinoxhua
[教师之家] 上海大学实验技术岗位非升即走 +7 嘻嘻哈哈乐呵呵 2026-05-15 7/350 2026-05-17 16:58 by songwz
[考博] 2026博士还有哪些学校有名额 +6 小王求读研 2026-05-15 7/350 2026-05-17 16:54 by 知音湖畔
[考博] 西南大学考核制博士 +5 lijunjie84 2026-05-11 8/400 2026-05-17 14:21 by 鹅鹅鹅鹅aaa
[考博] 26/27博士推荐 +3 1木头人13949 2026-05-13 3/150 2026-05-17 09:41 by YuY66
[基金申请] 重磅!青年科学基金项目(C类)资助增幅预计超过50% +7 水和泥不是水泥 2026-05-13 9/450 2026-05-17 08:28 by soxiaomucong
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 v9tggjlwd0 2026-05-15 4/200 2026-05-17 08:11 by 11n4dfd8yn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 v9tggjlwd0 2026-05-15 4/200 2026-05-17 08:06 by 11n4dfd8yn
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 7hlccowb3h 2026-05-15 4/200 2026-05-17 07:46 by 11n4dfd8yn
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 l7k6xnh0yc 2026-05-14 6/300 2026-05-17 07:31 by 11n4dfd8yn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 cjf4bx70cj 2026-05-14 7/350 2026-05-17 06:55 by 11n4dfd8yn
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k37jurhrau 2026-05-16 3/150 2026-05-17 01:25 by ue3ir18jc3
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 v9tggjlwd0 2026-05-15 5/250 2026-05-17 00:32 by xiangfeng
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 x0mp7owy2b 2026-05-15 5/250 2026-05-17 00:29 by xiangfeng
[基金申请] 青C资助名额大幅增加! +11 西葫芦炒鸡蛋 2026-05-13 15/750 2026-05-15 14:36 by ambravo
[教师之家] 教学课件你会给同学吗 +8 硕士研究生吗 2026-05-13 8/400 2026-05-14 22:23 by 常规沥青
[论文投稿] 求助大佬sci投稿哪个好中 +3 江沅188 2026-05-12 4/200 2026-05-13 14:35 by 江沅188
信息提示
请填处理意见