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芥末本绿

金虫 (正式写手)

[交流] 基因双酶切 已有5人参与

PCR得到目的基因,胶回收后进行双酶切反应。30ul酶切体系。
1.胶回收后的浓度跑胶后应该有100ng/ul,双酶切的时候会不会浓度太高切不动?
2.EcoR 1酶切0.5h后就会产生星号活性,我们一般都是过夜切,双酶切以后基因出现多条带,有没有什么办法改进?

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芥末本绿

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 厚德求是 at 2018-08-11 22:16:59
PCR产物纯化后跑一下胶,看看是不是引物浓度高了,p出了非特异性条带。

这些都是正常的,我还是考虑星号活性的问题

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4楼2018-08-12 06:58:11
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ttrying

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-08-12 08:58:30
检查基因内部是否有相应酶切位点,常用内切酶一般不会把基因切碎的。

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2楼2018-08-11 20:18:33
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厚德求是

木虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-08-12 08:58:48
PCR产物纯化后跑一下胶,看看是不是引物浓度高了,p出了非特异性条带。

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3楼2018-08-11 22:16:59
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芥末本绿

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ttrying at 2018-08-11 20:18:33
检查基因内部是否有相应酶切位点,常用内切酶一般不会把基因切碎的。

检查过是没有的,设计引物得时候就看了

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5楼2018-08-12 06:58:58
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