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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 基因回补的验证
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yoyoyou

新虫 (小有名气)

[交流] 基因回补的验证

请教，做缺失突变株的基因回补有两个月了，回补株的验证总是出现问题，首先，说一下我用的验证方法：1、重组质粒用pET-28a，带有卡那霉素抗性，回补株用卡那平板进行筛选；2、利用目的基因引物进行菌液PCR，看能否扩增出目的条带；3、另外设计一组目的基因外侧的长片段引物，提取DNA后进行PCR，看是否出现长片段的条带。现在我的主要问题出现在第3个验证，长片段总是P不出来，请教各位，有没有相似经历，有的话怎么解决？或者有什么更好的验证方法可以建议一下？谢谢各位啦
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1楼 2018-07-04 16:41:25
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yoyoyou

新虫 (小有名气)
引用回帖:
37楼: Originally posted by 呆呆戴戴 at 2018-07-12 11:15:18
长片段有多长 验证目的基因其中一段就可以吧

长片段2300bp，目的基因包含在内，目的基因700bp和1400bp，长片段是在目的基因两侧延伸了几百bp，老师说是为了验证目的基因是不是正确的回补到了原来的位置，我现在问题在于回补株中目的基因可以P出来，但是长片段P不出来，这样可以算回补成功么？
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38楼2018-07-13 16:03:07
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大大293楼
2018-07-04 17:06   回复  
yoyoyou(金币+1): 谢谢参与
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117921559112楼
2018-07-04 17:31   回复  
yoyoyou(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
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