应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白测不到活性，求解答
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
91/1返回列表
查看: 1570  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

蛐蛐儿儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白测不到活性，求解答 已有2人参与

本人用镍柱纯化蛋白后，跑SDS发现咪唑浓度为20mM时条带最亮最宽，收集20mM咪唑的洗脱液之后，超滤浓缩（除咪唑了）之后发现测不到酶活。

细胞发酵液，细胞发酵液破碎后的液体，收集细胞重悬并破碎的液体，破碎液离心取的上清，以及经过镍柱第一次收集的液体均可以测到酶活且都较高.

0mM的咪唑也可以测到活性但相对较低，5.10.20...mM(除去咪唑和不除去均测不到)的洗脱液均测不到活性

未加IPTG诱导的工程菌测不到酶活

有大神可以为我解释一下吗？本人研二，这个问题解决不了怕真的要延期了 T.T
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-07-03 16:02:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-08-31 08:21:25
20mM洗脱比较奇怪，一般这个浓度洗杂。100-300mM洗脱。我们用purimag的Ni磁珠是这样的。

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2018-07-03 21:25:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛐蛐儿儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yubeihong at 2018-07-03 21:25:41
20mM洗脱比较奇怪，一般这个浓度洗杂。100-300mM洗脱。我们用purimag的Ni磁珠是这样的。

先谢过了。。。

SDS显示经过5mM.10mM洗脱后杂蛋白已所剩无几了，20和50mM时条带都比较亮，200mM就只剩下很浅很细的一条带了，500mM完全就没有条带了
赞一下 回复此楼
3楼2018-07-04 10:03:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白话八股

金虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-08-31 08:21:46
5mM咪唑就能洗下来？你确定配置没问题？平衡液里面咪唑浓度都这个值了

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
最爱的那个人会出现在身边。
4楼2018-07-04 10:22:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

5就是5丫丫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2018-08-31 08:21:59
可能性有二个：
一是纯化的过程中你的蛋白失活了，所以导致有蛋白条带但无酶活；
二是你用20mM的咪唑洗脱得到的酶液里面可能没有你的目的蛋白，有可能是与之大小一致的杂蛋白，如果是这样的话，你的 目的蛋白并没有被洗脱下来；
   问下你纯化过程中滤出液有没有 酶活呢？另外你用100-300mM的咪唑洗脱之后的酶液是否有酶活呢？不能仅仅看蛋白多少来判定的，另外我看你都是通过SDS-PAGE检测 ，并没有做WB，建议你可以做个 WB看一下你的目标蛋白含量情况呢
赞一下 回复此楼
5楼2018-07-04 10:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛐蛐儿儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 5就是5丫丫 at 2018-07-04 10:24:32
可能性有二个：
一是纯化的过程中你的蛋白失活了，所以导致有蛋白条带但无酶活；
二是你用20mM的咪唑洗脱得到的酶液里面可能没有你的目的蛋白，有可能是与之大小一致的杂蛋白，如果是这样的话，你的 目的蛋白并没 ...

纯化过程中滤出液有酶活。100-300mM还没有测活性，20,50mM测一下没有活性就没有信心了...，等测完后再给您答复  非常感谢！
赞一下 回复此楼
6楼2018-07-04 10:53:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛐蛐儿儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 白话八股 at 2018-07-04 10:22:55
5mM咪唑就能洗下来？你确定配置没问题？平衡液里面咪唑浓度都这个值了

5/10mM确实可以把杂蛋白洗脱下来啊，伯乐的柱子，我觉得应该没问题啊，我们的平衡液不含咪唑的
赞一下 回复此楼
7楼2018-07-04 10:57:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nicky9266

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-08-31 08:22:14
1、蛋白失活；
2、20mM洗脱？我的裂解缓冲液里咪唑都20了……推测洗脱下来的不是目的蛋白，建议多个his的western确定下。
赞一下 回复此楼
8楼2018-07-06 15:53:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zrj123456

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 蛐蛐儿儿 at 2018-07-04 10:57:13
5/10mM确实可以把杂蛋白洗脱下来啊，伯乐的柱子，我觉得应该没问题啊，我们的平衡液不含咪唑的...

楼主有解决这个问题吗？我遇到了一模一样的问题
赞一下 回复此楼
9楼2018-08-30 19:58:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 蛐蛐儿儿 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +8 张zz111 2026-03-27 9/450 2026-03-28 03:41 by fmesaito
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 考研调剂 +4 Sanmu-124 2026-03-26 4/200 2026-03-27 17:49 by kiokin
[考研] 307求调剂 +8 超级伊昂大王 2026-03-24 9/450 2026-03-27 15:34 by 超级伊昂大王
[考研] 269专硕求调剂 +10 金恩贝 2026-03-21 10/500 2026-03-27 15:10 by caszguilin
[考研] 0703一志愿9，初试成绩：338，四六级已过，有科研经历，求调剂！ +3 Zuhui0306 2026-03-25 3/150 2026-03-27 14:09 by shangxh
[考研] 311求调剂 +7 lin0039 2026-03-26 7/350 2026-03-27 12:42 by 果果妈咪
[考研] 一志愿211，335分，0856，求调剂院校和导师 +4 倾____萧 2026-03-27 5/250 2026-03-27 11:52 by zhshch
[考研] 一志愿郑大085600，310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +4 w320357296 2026-03-25 6/300 2026-03-25 17:59 by 255671
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:20 by mx.yue
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭