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凯恩血蹄

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 三鱼舟 at 2018-07-08 14:25:08
您好,我想问一下,您有了解怎么样去建立甲醇添加的数学模型?还有为什么要诱导时间这么长?10多天不是会有蛋白降解,菌死亡等问题吗?
...

诱导期、对数期表达量很小,平衡期表达量会升高。我说的这些是分批补料发酵,您做的是这个方式吗?
11楼2018-07-09 18:50:49
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 凯恩血蹄 at 2018-07-09 18:46:47
这方面的资料很多,网上、书上都有,但需要根据自己的情况找出那几个常数。我说的10-15天是诱导后培养时间,完成甲醇诱导后持续培养的时间。甲醇诱导阶段一般不会超过24h。...

但甲醇诱导不是要每隔24小时补料吗?因为甲醇既是诱导剂又是碳源

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12楼2018-07-09 21:25:56
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 凯恩血蹄 at 2018-07-09 18:50:49
诱导期、对数期表达量很小,平衡期表达量会升高。我说的这些是分批补料发酵,您做的是这个方式吗?...

我是摇瓶发酵

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13楼2018-07-09 21:26:53
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xiaomu321

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主用的表达载体是什么?如何构建重组质粒并且转化酵母的?
至于甲醇添加量和添加时间,甲醇浓度0.5%感觉低了些,诱导时间72小时也不是很长。不过这两个因素大概会影响蛋白表达量,而不是没有。
毕赤表达蛋白会出现糖基化问题,如果你的载体没有问题可以考虑一下这个,祝好!
14楼2018-07-13 17:02:34
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by xiaomu321 at 2018-07-13 17:02:34
楼主用的表达载体是什么?如何构建重组质粒并且转化酵母的?
至于甲醇添加量和添加时间,甲醇浓度0.5%感觉低了些,诱导时间72小时也不是很长。不过这两个因素大概会影响蛋白表达量,而不是没有。
毕赤表达蛋白会出 ...

我用过pPICZαC ppic9k

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15楼2018-07-15 11:39:10
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 三鱼舟 at 2018-07-15 11:39:10
我用过pPICZαC ppic9k
...

我的蛋白只有一个糖基化位点,我也表达过其他蛋白,又两个糖基化位点,但也能表达啊

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16楼2018-07-15 11:39:45
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qq1987nana

新虫 (小有名气)

很明显,分析下序列,可能有跨膜区

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17楼2018-07-16 09:53:14
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
17楼: Originally posted by qq1987nana at 2018-07-16 09:53:14
很明显,分析下序列,可能有跨膜区

没有跨膜区

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18楼2018-07-16 13:17:56
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孤鸿豪豪

新虫 (著名写手)

19楼2018-09-19 15:41:50
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随意吧12

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

各位大佬,做毕赤酵母表达时有遇到过,电转后调菌小量表达,做WB检测有目的条带,提取基因组pcr有目的条带电转进入,但是放大后纯化出来没有蛋白。做WB也没有检测到有蛋白出现。这个和电转的质粒能不能在毕赤酵母内稳定遗传表达有关系吗?
20楼2018-09-28 16:11:04
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