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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达蛋白求助 已有4人参与

我的蛋白在毕赤酵母GS115 mut+ 中表达,大小在37kda左右,利用BMMY进行蛋白诱导,甲醇浓度为0.5%,诱导48h 72h后进行检测,发现上清中没有我要的蛋白,但是在沉淀中出现了45kda左右的条带,这是western blot的结果。做了阴性对照,我自己觉得沉淀中的蛋白可能是因为α肽没有被切掉,蛋白被滞留在了内质网没有分泌出来。
请问各位有没有出现过这种情况,如果有的话该怎么解决!跪谢!!

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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by xiaomu321 at 2018-07-13 17:02:34
楼主用的表达载体是什么?如何构建重组质粒并且转化酵母的?
至于甲醇添加量和添加时间,甲醇浓度0.5%感觉低了些,诱导时间72小时也不是很长。不过这两个因素大概会影响蛋白表达量,而不是没有。
毕赤表达蛋白会出 ...

我用过pPICZαC ppic9k

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15楼2018-07-15 11:39:10
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗?用不用浓缩?酶活啥时候测?

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2楼2018-07-03 14:50:29
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-07-03 14:50:29
请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗?用不用浓缩?酶活啥时候测?

是的,SDS-PAGE和WB都检测了,都没有,酶活没检测

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3楼2018-07-03 17:33:47
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-07-03 14:50:29
请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗?用不用浓缩?酶活啥时候测?

浓缩了,而且浓缩近百倍

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4楼2018-07-03 17:34:31
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