应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 毕赤酵母表达蛋白求助
201/2返回列表12下一页
查看: 2817  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

三鱼舟

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达蛋白求助 已有4人参与

我的蛋白在毕赤酵母GS115 mut+ 中表达，大小在37kda左右，利用BMMY进行蛋白诱导，甲醇浓度为0.5%，诱导48h 72h后进行检测，发现上清中没有我要的蛋白，但是在沉淀中出现了45kda左右的条带,这是western blot的结果。做了阴性对照，我自己觉得沉淀中的蛋白可能是因为α肽没有被切掉，蛋白被滞留在了内质网没有分泌出来。
请问各位有没有出现过这种情况，如果有的话该怎么解决！跪谢！！

@天使托 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-06-29 16:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗？用不用浓缩？酶活啥时候测？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2018-07-03 14:50:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三鱼舟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-07-03 14:50:29
请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗？用不用浓缩？酶活啥时候测？

是的，SDS-PAGE和WB都检测了，都没有，酶活没检测

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2018-07-03 17:33:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三鱼舟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-07-03 14:50:29
请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗？用不用浓缩？酶活啥时候测？

浓缩了，而且浓缩近百倍

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2018-07-03 17:34:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by 三鱼舟 at 2018-07-03 17:33:47
是的，SDS-PAGE和WB都检测了，都没有，酶活没检测
...

好的，谢谢
回复此楼
5楼2018-07-03 17:59:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

-字仲康

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
6楼2018-07-03 19:23:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三鱼舟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by -字仲康 at 2018-07-03 19:23:40
a信号肽被切割了，不才是滞留在胞内吗？
45KD处似乎会是有宿主蛋白的。没有的话，可能是蛋白没有表达吧

阴性对照胞内没有这条带，说明不是宿主的蛋白。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2018-07-05 14:42:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯恩血蹄

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

没做过这种，但做过相关的，诱导后甲醇浓度不应一直为0.5%，甲醇浓度高会导致酵母菌中毒，繁殖慢，所需甲醇的补加量应该随酵母菌数量变化，所以需要建立甲醇补料的数学模型（建好模型就不需要购买培养基诱导了）。培养48、72小时，时间太短，连续发酵10-15天试试
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

三鱼舟
8楼2018-07-08 12:24:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三鱼舟

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 凯恩血蹄 at 2018-07-08 12:24:14
没做过这种，但做过相关的，诱导后甲醇浓度不应一直为0.5%，甲醇浓度高会导致酵母菌中毒，繁殖慢，所需甲醇的补加量应该随酵母菌数量变化，所以需要建立甲醇补料的数学模型（建好模型就不需要购买培养基诱导了）。培 ...

您好，我想问一下，您有了解怎么样去建立甲醇添加的数学模型？还有为什么要诱导时间这么长？10多天不是会有蛋白降解，菌死亡等问题吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2018-07-08 14:25:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯恩血蹄

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 三鱼舟 at 2018-07-08 14:25:08
您好，我想问一下，您有了解怎么样去建立甲醇添加的数学模型？还有为什么要诱导时间这么长？10多天不是会有蛋白降解，菌死亡等问题吗？
...

这方面的资料很多，网上、书上都有，但需要根据自己的情况找出那几个常数。我说的10-15天是诱导后培养时间，完成甲醇诱导后持续培养的时间。甲醇诱导阶段一般不会超过24h。
赞一下 回复此楼
10楼2018-07-09 18:46:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 三鱼舟 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭