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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 毕赤酵母表达蛋白求助
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达蛋白求助 已有4人参与

我的蛋白在毕赤酵母GS115 mut+ 中表达，大小在37kda左右，利用BMMY进行蛋白诱导，甲醇浓度为0.5%，诱导48h 72h后进行检测，发现上清中没有我要的蛋白，但是在沉淀中出现了45kda左右的条带,这是western blot的结果。做了阴性对照，我自己觉得沉淀中的蛋白可能是因为α肽没有被切掉，蛋白被滞留在了内质网没有分泌出来。
请问各位有没有出现过这种情况，如果有的话该怎么解决！跪谢！！

@天使托 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-06-29 16:55:45
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凯恩血蹄

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 三鱼舟 at 2018-07-08 14:25:08
您好，我想问一下，您有了解怎么样去建立甲醇添加的数学模型？还有为什么要诱导时间这么长？10多天不是会有蛋白降解，菌死亡等问题吗？
...

这方面的资料很多，网上、书上都有，但需要根据自己的情况找出那几个常数。我说的10-15天是诱导后培养时间，完成甲醇诱导后持续培养的时间。甲醇诱导阶段一般不会超过24h。
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10楼2018-07-09 18:46:47
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗？用不用浓缩？酶活啥时候测？

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2楼2018-07-03 14:50:29
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-07-03 14:50:29
请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗？用不用浓缩？酶活啥时候测？

是的，SDS-PAGE和WB都检测了，都没有，酶活没检测

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3楼2018-07-03 17:33:47
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-07-03 14:50:29
请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗？用不用浓缩？酶活啥时候测？

浓缩了，而且浓缩近百倍

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4楼2018-07-03 17:34:31
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