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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达蛋白求助 已有4人参与

我的蛋白在毕赤酵母GS115 mut+ 中表达,大小在37kda左右,利用BMMY进行蛋白诱导,甲醇浓度为0.5%,诱导48h 72h后进行检测,发现上清中没有我要的蛋白,但是在沉淀中出现了45kda左右的条带,这是western blot的结果。做了阴性对照,我自己觉得沉淀中的蛋白可能是因为α肽没有被切掉,蛋白被滞留在了内质网没有分泌出来。
请问各位有没有出现过这种情况,如果有的话该怎么解决!跪谢!!

@天使托 发自小木虫Android客户端
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凯恩血蹄

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 三鱼舟 at 2018-07-08 14:25:08
您好,我想问一下,您有了解怎么样去建立甲醇添加的数学模型?还有为什么要诱导时间这么长?10多天不是会有蛋白降解,菌死亡等问题吗?
...

诱导期、对数期表达量很小,平衡期表达量会升高。我说的这些是分批补料发酵,您做的是这个方式吗?
11楼2018-07-09 18:50:49
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗?用不用浓缩?酶活啥时候测?

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2楼2018-07-03 14:50:29
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-07-03 14:50:29
请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗?用不用浓缩?酶活啥时候测?

是的,SDS-PAGE和WB都检测了,都没有,酶活没检测

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3楼2018-07-03 17:33:47
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-07-03 14:50:29
请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗?用不用浓缩?酶活啥时候测?

浓缩了,而且浓缩近百倍

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4楼2018-07-03 17:34:31
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