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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达蛋白求助 已有4人参与

我的蛋白在毕赤酵母GS115 mut+ 中表达,大小在37kda左右,利用BMMY进行蛋白诱导,甲醇浓度为0.5%,诱导48h 72h后进行检测,发现上清中没有我要的蛋白,但是在沉淀中出现了45kda左右的条带,这是western blot的结果。做了阴性对照,我自己觉得沉淀中的蛋白可能是因为α肽没有被切掉,蛋白被滞留在了内质网没有分泌出来。
请问各位有没有出现过这种情况,如果有的话该怎么解决!跪谢!!

@天使托 发自小木虫Android客户端
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随意吧12

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

各位大佬,做毕赤酵母表达时有遇到过,电转后调菌小量表达,做WB检测有目的条带,提取基因组pcr有目的条带电转进入,但是放大后纯化出来没有蛋白。做WB也没有检测到有蛋白出现。这个和电转的质粒能不能在毕赤酵母内稳定遗传表达有关系吗?
20楼2018-09-28 16:11:04
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