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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达蛋白求助 已有4人参与

我的蛋白在毕赤酵母GS115 mut+ 中表达,大小在37kda左右,利用BMMY进行蛋白诱导,甲醇浓度为0.5%,诱导48h 72h后进行检测,发现上清中没有我要的蛋白,但是在沉淀中出现了45kda左右的条带,这是western blot的结果。做了阴性对照,我自己觉得沉淀中的蛋白可能是因为α肽没有被切掉,蛋白被滞留在了内质网没有分泌出来。
请问各位有没有出现过这种情况,如果有的话该怎么解决!跪谢!!

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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 凯恩血蹄 at 2018-07-09 18:46:47
这方面的资料很多,网上、书上都有,但需要根据自己的情况找出那几个常数。我说的10-15天是诱导后培养时间,完成甲醇诱导后持续培养的时间。甲醇诱导阶段一般不会超过24h。...

但甲醇诱导不是要每隔24小时补料吗?因为甲醇既是诱导剂又是碳源

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12楼2018-07-09 21:25:56
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗?用不用浓缩?酶活啥时候测?

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2楼2018-07-03 14:50:29
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-07-03 14:50:29
请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗?用不用浓缩?酶活啥时候测?

是的,SDS-PAGE和WB都检测了,都没有,酶活没检测

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3楼2018-07-03 17:33:47
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-07-03 14:50:29
请问上清液检测蛋白是用SDS-PAGE的吗?用不用浓缩?酶活啥时候测?

浓缩了,而且浓缩近百倍

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4楼2018-07-03 17:34:31
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