24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

103007054025

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 11.2
散金: 49
红花: 3
帖子: 138
在线: 62.1小时
虫号: 1393924
注册: 2011-09-07
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 一个表达载体里插入两个蛋白在大肠杆菌中实现同时表达已有3人参与

大家好，我有一个问题想咨询一下大家，现在有两个蛋白MW分别是36KD和40KD,而且这两个蛋白在酶促反应中是共同起作用的，
因此我想做一个共同表达，即在一个表达载体里插入两个蛋白，分别表达这2个蛋白，想把这两个蛋白构建在同一个读码框内，那么在构建载体的时候，有几个问题想咨询一下大家：
（1）是否可以共用同一个启动子？共用同一个启动子的话表达效率怎么样，有没有做过的呀？
（2）目的基因1的终止密码子是否需要去除？
（3）目的基因1与目的基因2之间是否需要加上一个柔性Linker？
（4）构建的结构是这样：启动子--操纵子--RBS--目的基因1---柔性Linker--目的基因2---终止密码子---terminator还是
启动子--操纵子--RBS--目的基因1---终止密码子---柔性Linker--目的基因2---终止密码子---terminator

回复此楼

» 猜你喜欢

1楼 2018-06-06 16:57:49

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

863828916

金虫 (正式写手)

应助: 12 (小学生)
金币: 223.4
散金: 413
红花: 14
沙发: 1
帖子: 599
在线: 260.7小时
虫号: 3152575
注册: 2014-04-21
性别: GG
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-17 09:02:59

可以插入两个蛋白基因在一个载体上面表达，我干过，相当不错。
你这各个元件的分布有问题，可以这样: ........RBS-目的基因1-终止子-RBS-目的基因2-终止密码子-terminator
中间不一定需要linker

赞一下

回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

103007054025

4楼2018-06-06 20:27:00

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 13 个回答

用户晓晓

木虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 45 (小学生)
金币: 1693.7
散金: 129
红花: 12
帖子: 607
在线: 104.9小时
虫号: 1474220
注册: 2011-11-03
性别: GG
专业: 细胞增殖、生长与分化

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+3, 鼓励交流 2018-07-17 09:02:49

1，原核生物中,一个启动子可以同时启动多个基因。在真核生物中,一般一个启动子只能启动一个基因（一般一般一般）。
2，目的基因1的终止子问题，有这个终止子那么就是两个基因，去掉这个终止子，如果阅读框不移码，那两个基因此时可以认为是一个基因（也就是你想说的融合蛋白）。此时一个启动子就足够了。所以如果用一个启动子那么基因1的终止子必须去除。
3，linker需要！（这个要不要主要跟你的蛋白有关，融合蛋白要发挥功能要保证不能大范围破坏原始蛋白的三级结构，比如你要融合的是简单的标签蛋白那么久没有必要加linker.。但是你要融合的是两个复杂的功能蛋白，最好加linker）。
4，中间有终止子后面的还怎么继续翻译？so......

祝楼主实验顺利！

赞一下(3人)

回复此楼