| 查看: 5159 | 回复: 12 | |||
103007054025铜虫 (小有名气)
|
[求助]
一个表达载体里插入两个蛋白在大肠杆菌中实现同时表达 已有3人参与
|
||
|
大家好，我有一个问题想咨询一下大家，现在有两个蛋白MW分别是36KD和40KD,而且这两个蛋白在酶促反应中是共同起作用的， 因此我想做一个共同表达，即在一个表达载体里插入两个蛋白，分别表达这2个蛋白，想把这两个蛋白构建在同一个读码框内，那么在构建载体的时候，有几个问题想咨询一下大家： （1）是否可以共用同一个启动子？共用同一个启动子的话表达效率怎么样，有没有做过的呀？ （2）目的基因1的终止密码子是否需要去除？ （3）目的基因1与目的基因2之间是否需要加上一个柔性Linker？ （4）构建的结构是这样：启动子--操纵子--RBS--目的基因1---柔性Linker--目的基因2---终止密码子---terminator还是 启动子--操纵子--RBS--目的基因1---终止密码子---柔性Linker--目的基因2---终止密码子---terminator |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有234人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
用户晓晓
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 45 (小学生)
- 金币: 1693.7
- 散金: 129
- 红花: 12
- 帖子: 607
- 在线: 104.9小时
- 虫号: 1474220
- 注册: 2011-11-03
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+3, 鼓励交流 2018-07-17 09:02:49
感谢参与，应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+3, 鼓励交流 2018-07-17 09:02:49
|
1，原核生物中,一个启动子可以同时启动多个基因。在真核生物中,一般一个启动子只能启动一个基因（一般一般一般）。 2，目的基因1的终止子问题，有这个终止子那么就是两个基因，去掉这个终止子，如果阅读框不移码，那两个基因此时可以认为是一个基因（也就是你想说的融合蛋白）。此时一个启动子就足够了。所以如果用一个启动子 那么基因1的终止子必须去除。 3，linker需要！（这个要不要主要跟你的蛋白有关，融合蛋白要发挥功能要保证不能大范围破坏原始蛋白的三级结构，比如你要融合的是简单的标签蛋白那么久没有必要加linker.。但是你要融合的是两个复杂的功能蛋白，最好加linker）。 4，中间有终止子后面的还怎么继续翻译？so...... 祝楼主实验顺利！ |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
1030070540252楼2018-06-06 17:21:24
3楼2018-06-06 17:55:12
soarrow
铁杆木虫 (正式写手)
酱油歪楼党
- MolEPI: 1
- 应助: 36 (小学生)
- 金币: 9904.6
- 红花: 20
- 帖子: 607
- 在线: 563小时
- 虫号: 1836931
- 注册: 2012-05-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒、病毒感染与宿主免疫
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-17 09:03:17
感谢参与，应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-17 09:03:17
|
可以用双启动子表达载体，比如Novagen的 pACYCDuet系列，两个T7 启动子。 也可以用一个启动子进行串联表达或者融合表达。4楼已经说了具体内容。 但是融合表达对两个酶的活性有没有影响？这个不能确定。如果要靠谱的话，建议把融合表达作为平行实验，这样即使表达后万一没有活性也不那么影响进度。  |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
5楼2018-06-07 03:54:51
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-17 09:02:59
感谢参与，应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-17 09:02:59
|
可以插入两个蛋白基因在一个载体上面表达，我干过，相当不错。 你这各个元件的分布有问题，可以这样: ........RBS-目的基因1-终止子-RBS-目的基因2-终止密码子-terminator 中间不一定需要linker |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
4楼2018-06-06 20:27:00
103007054025
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 11.2
- 散金: 49
- 红花: 3
- 帖子: 138
- 在线: 62.1小时
- 虫号: 1393924
- 注册: 2011-09-07
- 专业: 微生物生理与生物化学
6楼2018-06-09 18:32:00
103007054025
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 11.2
- 散金: 49
- 红花: 3
- 帖子: 138
- 在线: 62.1小时
- 虫号: 1393924
- 注册: 2011-09-07
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2018-06-09 18:32:54
103007054025
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 11.2
- 散金: 49
- 红花: 3
- 帖子: 138
- 在线: 62.1小时
- 虫号: 1393924
- 注册: 2011-09-07
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2018-06-09 18:33:11
103007054025
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 11.2
- 散金: 49
- 红花: 3
- 帖子: 138
- 在线: 62.1小时
- 虫号: 1393924
- 注册: 2011-09-07
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2018-06-09 18:34:17
10楼2018-07-16 10:20:36
25