应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » p基因全长3’嘤嘤嘤
51/1返回列表
查看: 778  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

342667457

新虫 (小有名气)

[交流] p基因全长3’嘤嘤嘤 已有1人参与

研一小白p基因全长，est出了，3撇送测序回来有poly 结构但是blast 不是自己的基因。哭哭哭哭……设计引物的时候能用的不多，都不好用可怎么办，挑菌的时候我是不是要挑好多好多……

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-05-31 10:56:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

用户晓晓

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 342667457 at 2018-05-31 19:20:43
确实有杂带呢~我下次跑胶注意一下其他的带，谢谢大神第一次发帖，收到了这么全面的回复，感动
...

RACE实验确实还是比较考验人的一个，难度系数按说并不是很高，也有质量很高的试剂盒可以购买。但是真正做了才能感受到这个实验的难度，其实最主要的几个问题：1，跟你做的基因有太大的关系，有的基因很容易得到结果，有的基因累到死都做不出来。2，转录本比较复杂的基因也会影响 3，不好判断未知片段的长度，有可能非常大，扩不全，也有可能很短，捕捉不到条带。

但是其实3端应该是比较简单的，因为有一般有polyA。而真正困难的是5端扩增。
赞一下 回复此楼
4楼2018-05-31 16:36:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

用户晓晓

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1，扩出来不是自己的基因说明你的引物特异性不行，那这样的话你的race条带应该也不是单一的，那就需要把另外的一些你认为是杂带的条带同样测序，可能里面有你需要的。
2，如果该基因不好设计引物的话，那你就利用基因组序列强行延长3‘端序列当做参考序列，然后设计引物利用cDNA进行扩增，碰运气，看看能不能延长3端序列，然后重新再确定的序列基础上再设计引物，看看是否可以避开非特异扩增。
3，大手笔，直接上三代全长转录组，测通该基因的所有全长转录本。

4，要是实在不行~~~兄弟，换课题吧~~~

祝试验顺利！
赞一下 回复此楼
2楼2018-05-31 11:24:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

342667457

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 用户晓晓 at 2018-05-31 11:24:41
1，扩出来不是自己的基因说明你的引物特异性不行，那这样的话你的race条带应该也不是单一的，那就需要把另外的一些你认为是杂带的条带同样测序，可能里面有你需要的。
2，如果该基因不好设计引物的话，那你就利用基 ...

确实有杂带呢~我下次跑胶注意一下其他的带，谢谢大神第一次发帖，收到了这么全面的回复，感动

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2018-05-31 15:20:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

342667457

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 用户晓晓 at 2018-05-31 16:36:18
RACE实验确实还是比较考验人的一个，难度系数按说并不是很高，也有质量很高的试剂盒可以购买。但是真正做了才能感受到这个实验的难度，其实最主要的几个问题：1，跟你做的基因有太大的关系，有的基因很容易得到结果 ...

导师让做的两个基因都还没出3’    希望至少有一个能p出来吧，本来收到测序心情低落，收到大神细心的回复又有了信心

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2018-05-31 16:54:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-24 6/300 2026-03-26 20:50 by 不吃魚的貓
[考研] 考研调剂 +8 小蜡新笔 2026-03-26 8/400 2026-03-26 16:18 by dick_runner
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +4 李轶男003 2026-03-20 4/200 2026-03-26 16:05 by 哇啦啦啦xtj
[考研] 297求调剂 +6 田洪有 2026-03-26 6/300 2026-03-26 15:55 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 308求调剂 +5 墨墨漠 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:19 by 544594351
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +4 w320357296 2026-03-25 6/300 2026-03-25 17:59 by 255671
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 359求调剂 +3 王了个楠 2026-03-25 3/150 2026-03-25 12:50 by Dyhoer
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭