应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 就问大神们，原核表达在上清里，然后要咋验证生物活性呀
111/2返回列表12下一页
查看: 1360  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

草哥cium

新虫 (正式写手)

[求助] 就问大神们，原核表达在上清里，然后要咋验证生物活性呀 已有2人参与

大神们我有一个问题，我总感觉自己氨基酸序列有突变，因为当初用的tap酶扩增的549bp片段用来做表达，不过也表达出来了，还在上清。所以想问问大神们，是不是一般要是氨基酸序列不太对是不会表达或者表达在上清的哇，一般都是咋验证蛋白质是不是有生物活性呀。。

@hc-material 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-05-30 20:23:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

草哥cium

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 863828916 at 2018-05-30 21:38:33
蛋白序列也不知道吗？实验室没有高保真酶？
氨基酸突变的话有可能会导致蛋白不再上清，也有可能导致蛋白失活，但是这个不是绝对的。好多氨基酸突变了蛋白仍然表达，仍然有活性。so你直接把表达的蛋白用亲和柱提取 ...

大神，是不是基本上 上清表达了就是蛋白质正确折叠了，就是有活性的哇。。。只是要是氨基酸突变了，可能活性改变了?  本人菜鸟

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2018-05-30 21:52:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

863828916

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
突没突变直接测个序不就知道了啊？
赞一下 回复此楼
2楼2018-05-30 20:53:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草哥cium

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 863828916 at 2018-05-30 20:53:20
突没突变直接测个序不就知道了啊？

ncbi..上没我这个序列。。第一个做的 没办法比对哇

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2018-05-30 21:29:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

863828916

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 草哥cium at 2018-05-30 21:29:24
ncbi..上没我这个序列。。第一个做的 没办法比对哇
...

蛋白序列也不知道吗？实验室没有高保真酶？
氨基酸突变的话有可能会导致蛋白不再上清，也有可能导致蛋白失活，但是这个不是绝对的。好多氨基酸突变了蛋白仍然表达，仍然有活性。so你直接把表达的蛋白用亲和柱提取出来直接测活性吧，毕竟活性好的话还管他图没突变
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

草哥cium
4楼2018-05-30 21:38:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
不可能ncbi都比对不出来

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2018-05-30 21:59:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草哥cium

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by biosci at 2018-05-30 21:59:19
不可能ncbi都比对不出来

因为没人做个这个蛋白啊...这个相近种的cdna 都是不久才被race法扩出来，类似文章才三篇。我研究的这个种的这个蛋白根本没人做过

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2018-05-30 22:12:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

863828916

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 草哥cium at 2018-05-30 21:52:33
大神，是不是基本上 上清表达了就是蛋白质正确折叠了，就是有活性的哇。。。只是要是氨基酸突变了，可能活性改变了?  本人菜鸟
...

在上清说明蛋白折叠可以，但是突变的话不一定会导致蛋白不正确折叠。氨基酸突变也不一定会导致活性丧尸，若突变发生在活性中心就可能会导致失活。所以你直接把蛋白提取出来直接先测活咯

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2018-05-30 22:26:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做Western Blot验证活性
赞一下 回复此楼
9楼2018-05-31 08:32:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jack1508

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hc-material at 2018-05-31 08:32:23
做Western Blot验证活性

wn能验证活性么？我一直认为wb是用来定性的。理论上不是wb过程中蛋白不是已经变性了么
赞一下 回复此楼
10楼2018-05-31 14:32:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 草哥cium 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +7 vv迷 2026-03-22 7/350 2026-03-23 23:44 by Txy@872106
[考研] 材料专业求调剂 +11 hanamiko 2026-03-18 11/550 2026-03-23 23:12 by peike
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +3 我爱学电池 2026-03-23 3/150 2026-03-23 17:16 by AZMK
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +5 葵梓卫队 2026-03-18 7/350 2026-03-23 16:26 by lingjue
[考研] 求调剂材料学硕080500，总分289分 5+3 @taotao 2026-03-19 21/1050 2026-03-23 10:17 by 冠c哥
[考研] 291求调剂 +5 孅華 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 354求调剂 +7 Tyoumou 2026-03-18 10/500 2026-03-22 11:11 by 人来盛
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！ +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 材料工程（专）一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂（有工作经验） +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭