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姜片123

新虫 (正式写手)

[求助] 求小分子量蛋白做western blot的方法和经验~

目标蛋白5-10KD,知道肯定有表达,但是做了western检测不到,感觉是方法不合适,比如电压,时间等没掌握好,希望做过的虫友给一些建议,谢谢~

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美亿美生物

捐助贵宾 (职业作家)

技术服务-实验代做


4楼2018-05-14 15:02:51
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star013

新虫 (知名作家)

西门吹雪170: 屏蔽内容, 禁止发布商业性回帖 2018-05-15 07:53:12
本帖内容被屏蔽

2楼2018-05-14 12:12:15
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Jack1508

新虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-05-15 07:52:35
主要还是膜的问题,您看以查一下跑小蛋白时胶的类型。。其他的方法不变。可能关键在于您的胶有问题
3楼2018-05-14 13:20:58
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冰之雪域

新虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-05-15 07:52:51
做小分子的蛋白,需要用浓度比较高的胶,比如15%,或是连续梯度的的比如4-20%的胶。转膜时,膜的孔径用0.22的,因小分子容易转穿。

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5楼2018-05-14 20:27:17
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姜片123

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Jack1508 at 2018-05-14 13:20:58
主要还是膜的问题,您看以查一下跑小蛋白时胶的类型。。其他的方法不变。可能关键在于您的胶有问题

用的就是tris胶,浓度是15%

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6楼2018-05-14 23:29:33
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姜片123

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Jack1508 at 2018-05-14 13:20:58
主要还是膜的问题,您看以查一下跑小蛋白时胶的类型。。其他的方法不变。可能关键在于您的胶有问题

用的就是tris胶,浓度是15%

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7楼2018-05-14 23:29:49
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姜片123

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 美亿美生物 at 2018-05-14 15:02:51
这个,还是要多跑几次呀

已经跑了几次了

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8楼2018-05-14 23:34:01
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姜片123

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 冰之雪域 at 2018-05-14 20:27:17
做小分子的蛋白,需要用浓度比较高的胶,比如15%,或是连续梯度的的比如4-20%的胶。转膜时,膜的孔径用0.22的,因小分子容易转穿。

好,会注意下,谢谢

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9楼2018-05-14 23:56:35
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姜片123

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by star013 at 2018-05-14 12:12:15
我们可以做wb技术服务哈

可以的话,可以交流下哈~

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10楼2018-05-14 23:57:11
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