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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 求小分子量蛋白做western blot的方法和经验～
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懵western

新虫 (初入文坛)
楼主你做出来了吗？我也折在小分子量上了，做出来都是一条线，目的蛋白那深一些，蛋白和loading分不开怎么办呢

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11楼2018-05-19 09:56:08
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zyyz365

铜虫 (小有名气)
请教各位大神们，封闭的时候用的是什么品牌的脱脂奶粉

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12楼2018-05-19 12:01:19
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懵western

新虫 (初入文坛)
楼主，你做的怎么样了呢？你有没有遇到过先是连成一条线的目的条带，然后再重新做一遍就没有条带了

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13楼2018-05-20 22:59:11
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懵western

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 姜片123 at 2018-05-14 11:41:01
目标蛋白5-10KD，知道肯定有表达，但是做了western检测不到，感觉是方法不合适，比如电压，时间等没掌握好，希望做过的虫友给一些建议，谢谢～

楼主你现在做出来了没？我也最近在做小分子，要么出的条带都连成一条线，要么就根本不出条带了，好想找个人问问啊

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14楼2018-05-20 23:01:41
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姜片123

新虫 (正式写手)
我用的膜的孔径有点大，现在就先放一放，等小孔径的膜到了再试一下，为什么会连成一条线呢，你用的是15孔还是10孔的胶呢，我没遇到过你这种情况，但是我之前做用十孔的胶比用15孔的胶的目的条带会好看一点，间隔会大一点。

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15楼2018-05-21 16:23:16
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姜片123

新虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 懵western at 2018-05-20 23:01:41
楼主你现在做出来了没？我也最近在做小分子，要么出的条带都连成一条线，要么就根本不出条带了，好想找个人问问啊
...

你的上样量是多少？蛋白的表达量大吗？至于有的时候能做出来，有的时候做不出来，我也有这种情况，我觉得做western有很多影响因素，同样的样品和条件，但是结果可能不同，我都是做不好就重新做，试了几次都不行就重新做样品，重新来做。

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16楼2018-05-21 16:31:58
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冰之雪域

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 懵western at 2018-05-20 22:59:11
楼主，你做的怎么样了呢？你有没有遇到过先是连成一条线的目的条带，然后再重新做一遍就没有条带了

我有遇到很多出现条带连在一起的现象。总结很多同学的实验结果看，首先小分子蛋白电泳后的条带不是特别的聚集，容易出现连在一起的情况，二是由于小分子电泳的时间是最长的，从胶孔跑到胶的底部，所以在做小分子蛋白时，需要在电泳的时候要注意降温，让小分子不会太弥散。

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17楼2018-08-07 19:14:26
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