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懵western

新虫 (初入文坛)

楼主你做出来了吗?我也折在小分子量上了,做出来都是一条线,目的蛋白那深一些,蛋白和loading分不开怎么办呢

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11楼2018-05-19 09:56:08
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zyyz365

铜虫 (小有名气)

请教各位大神们,封闭的时候用的是什么品牌的脱脂奶粉

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12楼2018-05-19 12:01:19
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懵western

新虫 (初入文坛)

楼主,你做的怎么样了呢?你有没有遇到过先是连成一条线的目的条带,然后再重新做一遍就没有条带了

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13楼2018-05-20 22:59:11
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懵western

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 姜片123 at 2018-05-14 11:41:01
目标蛋白5-10KD,知道肯定有表达,但是做了western检测不到,感觉是方法不合适,比如电压,时间等没掌握好,希望做过的虫友给一些建议,谢谢~

楼主你现在做出来了没?我也最近在做小分子,要么出的条带都连成一条线,要么就根本不出条带了,好想找个人问问啊

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14楼2018-05-20 23:01:41
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姜片123

新虫 (正式写手)

我用的膜的孔径有点大,现在就先放一放,等小孔径的膜到了再试一下,为什么会连成一条线呢,你用的是15孔还是10孔的胶呢,我没遇到过你这种情况,但是我之前做用十孔的胶比用15孔的胶的目的条带会好看一点,间隔会大一点。

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15楼2018-05-21 16:23:16
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姜片123

新虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 懵western at 2018-05-20 23:01:41
楼主你现在做出来了没?我也最近在做小分子,要么出的条带都连成一条线,要么就根本不出条带了,好想找个人问问啊
...

你的上样量是多少?蛋白的表达量大吗?至于有的时候能做出来,有的时候做不出来,我也有这种情况,我觉得做western有很多影响因素,同样的样品和条件,但是结果可能不同,我都是做不好就重新做,试了几次都不行就重新做样品,重新来做。

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16楼2018-05-21 16:31:58
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冰之雪域

新虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 懵western at 2018-05-20 22:59:11
楼主,你做的怎么样了呢?你有没有遇到过先是连成一条线的目的条带,然后再重新做一遍就没有条带了

我有遇到很多出现条带连在一起的现象。总结很多同学的实验结果看,首先小分子蛋白电泳后的条带不是特别的聚集,容易出现连在一起的情况,二是由于小分子电泳的时间是最长的,从胶孔跑到胶的底部,所以在做小分子蛋白时,需要在电泳的时候要注意降温,让小分子不会太弥散。

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17楼2018-08-07 19:14:26
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