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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 波谱分析 » HPLC 流动相用磷酸缓冲液对柱子损坏很大吗
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Yub508

新虫 (正式写手)

[交流] HPLC 流动相用磷酸缓冲液对柱子损坏很大吗

我测得物质在210nm 有最大吸收，水相也试过甲酸 乙酸及缓冲盐 得不到想要的峰形，最后用磷酸二氢钾溶液 （30mM，用磷酸调pH2.5左右），有机相用乙腈，缓冲盐/乙腈比例 35/65，提前混合过 并没有晶体析出，因为知道缓冲盐容易堵塞柱子，测试完会用大比例水相冲一个小时，接着以大比例有机相充一会儿封存柱子；
今天实验室妹子给我说最好不要用磷酸盐缓冲液（但我觉得只能选磷酸盐 ，210nm 甲酸 醋酸缓冲液都不合适），说很有可能用一段就堵塞柱子，想问下大家 如果我按以上操作做测试得话，还是会对色谱柱有不可逆得损害吗？希望指导。
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1楼 2018-03-16 00:53:31
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jixfeng

木虫 (正式写手)
★
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没问题的，何况预混过滤了。 如梯度到65%，则盐浓度有点高了。  若不是考虑离子强度概念的话，此缓冲液建议磷酸 或者 tfa 即可

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44楼2018-03-17 05:10:03
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superyeast

专家顾问 (职业作家)
★
Yub508(金币+3): 谢谢参与
30mM 是比较高了，容易析出晶体。如果能够在10-20mM 得到能接受的峰形会好很多。

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26楼2018-03-16 03:51:17
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psd0714

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
系统压力很大，容易堵

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36楼2018-03-16 07:02:41
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wjc115725742

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用完后，用90%水冲3-4个小时！！

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38楼2018-03-16 07:40:41
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lingshu

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用前用后洗好没有问题  我们的药物很少不用缓冲盐的

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39楼2018-03-16 07:59:16
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twm1991

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
觉得没那么严重，用完后冲洗干净就好了

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40楼2018-03-16 08:19:54
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chaiyin1991

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你这应该是反相柱吧。。。反相柱也就会怕高比例水或者碱性，你如果怕浓度太高析出的话可以自己做下实验看看30mmPB会不会在40%ACN析出，30mMPB不算浓吧。。。。正能说是正常，不知道楼上说偏高是什么鬼
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Yub508
42楼2018-03-16 21:14:23
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xx小小xx

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
磷酸盐是常用的液相缓冲盐，使用只要符合规则，不会影响寿命的。最基本的几条就是现配现用、用前过滤、用后清洗、冲洗泵头，做到这些，基本上不会有大问题。
不过你现在这个条件有点问题。pH=2.5的话，磷酸会比磷酸二氢钾多，所以你先加30mM的磷酸二氢钾其实太多了。而且你的乙腈达到65%，算比较高了，盐太高有析出的危险。你可以试一下用10mM的磷酸二氢钾，或者只加磷酸不加磷酸二氢钾，或者改用三氟乙酸。
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Yub508
45楼2018-03-17 16:07:27
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chaiyin1991

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
43楼: Originally posted by Yub508 at 2018-03-17 00:05:33
对 反相色谱柱  怕高比例水吗……？因为我每次测试完基本都用90%比例水冲一个多小时
...

我不知道你的柱子是什么品牌的什么系列，如果是普通C18那90比例肯定高了，一般只有一些经过表面经过特殊修饰的C18才会用这么高比例的水或者纯水相
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46楼2018-03-17 19:26:59
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xx小小xx

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
48楼: Originally posted by Yub508 at 2018-03-18 21:40:43
谢谢建议，我在I试试低浓度的…三氟乙酸在210nm是不是有强烈吸收呀
还有如果我继续用缓冲盐的话，用后清洗的步骤你有什么建议吗？多谢啦
...

三氟乙酸的吸收算是比较弱的，只要浓度不是很高都问题不大。欧盟药典里面有测银杏酸的方法，就是用的三氟乙酸，波长210nm。
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49楼2018-03-19 12:27:19
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xx小小xx

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
48楼: Originally posted by Yub508 at 2018-03-18 21:40:43
谢谢建议，我在I试试低浓度的…三氟乙酸在210nm是不是有强烈吸收呀
还有如果我继续用缓冲盐的话，用后清洗的步骤你有什么建议吗？多谢啦
...

清洗的步骤，你原来的做法没问题。你注意一下泵头和柱塞杆的清洗，有些仪器是有自动清洗装置的，没有的就有手动清洗，仪器说明书会有讲的。
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50楼2018-03-19 12:30:04
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xngfvgb178

木虫 (著名写手)
★
Yub508(金币+3): 谢谢参与
::::
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15楼2018-03-16 01:44:33
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zxz.1982

至尊木虫 (职业作家)
降低浓度试试

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37楼2018-03-16 07:36:29
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saowe

木虫 (正式写手)
不会，

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41楼2018-03-16 13:12:25
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Yub508

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
42楼: Originally posted by chaiyin1991 at 2018-03-16 21:14:23
你这应该是反相柱吧。。。反相柱也就会怕高比例水或者碱性，你如果怕浓度太高析出的话可以自己做下实验看看30mmPB会不会在40%ACN析出，30mMPB不算浓吧。。。。正能说是正常，不知道楼上说偏高是什么鬼

对 反相色谱柱  怕高比例水吗……？因为我每次测试完基本都用90%比例水冲一个多小时

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43楼2018-03-17 00:05:33
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朱朱白白

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没有多大问题，最高有机相比例65能溶解不会析出来的话

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47楼2018-03-17 22:00:29
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Yub508

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
45楼: Originally posted by xx小小xx at 2018-03-17 16:07:27
磷酸盐是常用的液相缓冲盐，使用只要符合规则，不会影响寿命的。最基本的几条就是现配现用、用前过滤、用后清洗、冲洗泵头，做到这些，基本上不会有大问题。
不过你现在这个条件有点问题。pH=2.5的话，磷酸会比磷酸 ...

谢谢建议，我在I试试低浓度的…三氟乙酸在210nm是不是有强烈吸收呀
还有如果我继续用缓冲盐的话，用后清洗的步骤你有什么建议吗？多谢啦

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48楼2018-03-18 21:40:43
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rrfwg272楼
2018-03-16 01:12   回复  
Yub508(金币+3): 谢谢参与
wkby3273楼
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wvbsg344楼
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mnxvch005楼
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syhorchid6楼
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xrmac857楼
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kmubwh2918楼
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kuhnv0959楼
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kyrtaac60211楼
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