[求助] 求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....已有4人参与

4楼: Originally posted by 苏氨酸 at 2018-02-05 15:54:39
包涵体溶解之前，有没有洗杂？建议用低浓度的尿素2M或4M洗杂

7楼: Originally posted by zsygxh at 2018-02-07 17:02:46
首先，你怎么纯化的，用什么buffer，pH，蛋白等电点等等信息都没有，不好帮你分析。只能笼统地给点建议
1.优化包涵体洗涤，去污剂、低浓度尿素，可以摸一下条件
2.溶解注意完全变性，以及二硫键打开
3.确认使用的 ...

6楼: Originally posted by why9639 at 2018-02-06 09:09:25
包涵体的我不太清楚，之前我做过胞外表达的酶，用AKTA蛋白纯化仪 基本上可以说就纯化不到纯酶，加样量增加，就能看到杂蛋白条带。若果是有设计组蛋白标签的，用镍柱会得到相对比较纯的酶

10楼: Originally posted by zsygxh at 2018-02-07 23:25:27
这个过于简单化了，这里没给出裂解液的配方，我不知道里面有没有加去污剂，你晃一下裂解液，看它是否容易产生泡沫，如果没有，那这个过程跟本没洗包涵体，只是简单破了菌，你可以在破菌后用buffer加0.5% Triton X- ...

10楼: Originally posted by zsygxh at 2018-02-07 23:25:27
这个过于简单化了，这里没给出裂解液的配方，我不知道里面有没有加去污剂，你晃一下裂解液，看它是否容易产生泡沫，如果没有，那这个过程跟本没洗包涵体，只是简单破了菌，你可以在破菌后用buffer加0.5% Triton X- ...

13楼: Originally posted by zsygxh at 2018-02-08 22:47:36
个人认为这是降解带的可能比较低，蛋白降解多数情况都是蛋白酶作用降解导致，首先你的蛋白表达时错误折叠形成包涵体，蛋白聚集在一起很难被降解，即使能降解也只有占比很少的一小部分，洗完包涵体之后直接变性，溶 ...

15楼: Originally posted by Crazy cat at 2018-04-03 17:16:57
emmmmmm，你这两张图我怎么好像在哪见过.............