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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....已有4人参与

用的康为世纪包涵体纯化试剂盒。binding buffer 中的咪唑浓度为5mM，洗杂蛋白也是5mM的，这次做了梯度洗脱，10，50，100，150，200，250，300，350，500，如下图图一。另一张图是以前用500mM咪唑洗脱的 ，梯度洗脱也洗不到纯的 好想哭，做了两个月的纯化了

求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....


求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....-1


@biostar2009 @飞约疯人院 @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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1楼2018-02-05 15:42:44
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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by zsygxh at 2018-02-08 22:47:36
个人认为这是降解带的可能比较低，蛋白降解多数情况都是蛋白酶作用降解导致，首先你的蛋白表达时错误折叠形成包涵体，蛋白聚集在一起很难被降解，即使能降解也只有占比很少的一小部分，洗完包涵体之后直接变性，溶 ...

嗯嗯 好的 谢谢你

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14楼2018-02-09 09:13:40
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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)
求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....-2

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2楼2018-02-05 15:45:14
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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)
表达量也可以 但是一纯化就少

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3楼2018-02-05 15:45:23
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苏氨酸

新虫 (小有名气)
包涵体溶解之前，有没有洗杂？建议用低浓度的尿素2M或4M洗杂

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4楼2018-02-05 15:54:39
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