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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....
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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....已有4人参与

用的康为世纪包涵体纯化试剂盒。binding buffer 中的咪唑浓度为5mM，洗杂蛋白也是5mM的，这次做了梯度洗脱，10，50，100，150，200，250，300，350，500，如下图图一。另一张图是以前用500mM咪唑洗脱的 ，梯度洗脱也洗不到纯的 好想哭，做了两个月的纯化了

求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....


求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....-1


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1楼2018-02-05 15:42:44
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苏氨酸

新虫 (小有名气)
包涵体溶解之前，有没有洗杂？建议用低浓度的尿素2M或4M洗杂

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4楼2018-02-05 15:54:39
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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)
求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....-2

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2楼2018-02-05 15:45:14
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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)
表达量也可以 但是一纯化就少

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3楼2018-02-05 15:45:23
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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 苏氨酸 at 2018-02-05 15:54:39
包涵体溶解之前，有没有洗杂？建议用低浓度的尿素2M或4M洗杂

没有呢  但是我低浓度洗脱的时候 那条杂蛋白是没有的 稍高一点就跟着目的蛋白一起洗下来了 我都怀疑是不是目的蛋白降解了

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5楼2018-02-05 22:10:15
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