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mjl3680

木虫 (小有名气)

[交流] 求助前辈,有做过绿色荧光蛋白融合表达的吗

我是将一个疏水蛋白和绿色荧光蛋白融合表达,IPTG诱导后能看到菌体有绿色荧光,但全细胞跑SDS-PAGE,看不出表达蛋白的条带,不知道能看到绿色荧光是否说明这个融合表达的蛋白是可溶的,电泳检测不到,除了做WESTERN,还有什么别的方便办法,或者有谁做过原核表达的,给些建议,我的载体是PET30a+,宿主是BL21大肠杆菌。
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

还有,刚才忘了说,你应该检测一下是否有包涵体,就是将菌体超声破碎,10000G以上离心,比较离心前后的跑胶接过,看是否减少。离心后取上清。
For my life!
5楼2009-03-04 15:46:51
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36678293

铜虫 (正式写手)

需要帮助吗,可以联系QQ:36678293,最低的价格,低的让你满意为止!
2楼2009-03-04 00:27:36
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jasco

木虫 (正式写手)

能看到荧光是说明gfp有表达,但不能说明是可溶的,你全菌sdspage看不到表达条带可能是表达量很低,我觉得先试试看能不能提高表达量,比如低温诱导过夜之类的方法。能做WB当然是最好的啦。
3楼2009-03-04 10:23:47
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

除了Western Blot以外,你还可以全菌包被做ELISA,但是除了免疫学检测的方法以外,应该没有什么很好的办法。除非你的蛋白有特殊的功能或者催化能力,你用相应的手段可以测出来,比如酶活等。有荧光的话应该是有所表达的,但是并不能绝对确定是融合蛋白的准确表达。还是做一做免疫学实验鉴定一下吧。还要看你纯化这个蛋白要做什么,有很多实验并不需要很多蛋白的。
For my life!
4楼2009-03-04 15:38:35
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