24小时热门版块排行榜    

查看: 599  |  回复: 6
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

mjl3680

木虫 (小有名气)

[交流] 求助前辈,有做过绿色荧光蛋白融合表达的吗

我是将一个疏水蛋白和绿色荧光蛋白融合表达,IPTG诱导后能看到菌体有绿色荧光,但全细胞跑SDS-PAGE,看不出表达蛋白的条带,不知道能看到绿色荧光是否说明这个融合表达的蛋白是可溶的,电泳检测不到,除了做WESTERN,还有什么别的方便办法,或者有谁做过原核表达的,给些建议,我的载体是PET30a+,宿主是BL21大肠杆菌。
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)

能看到荧光是说明gfp有表达,但不能说明是可溶的,你全菌sdspage看不到表达条带可能是表达量很低,我觉得先试试看能不能提高表达量,比如低温诱导过夜之类的方法。能做WB当然是最好的啦。
3楼2009-03-04 10:23:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

36678293

铜虫 (正式写手)

需要帮助吗,可以联系QQ:36678293,最低的价格,低的让你满意为止!
2楼2009-03-04 00:27:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

除了Western Blot以外,你还可以全菌包被做ELISA,但是除了免疫学检测的方法以外,应该没有什么很好的办法。除非你的蛋白有特殊的功能或者催化能力,你用相应的手段可以测出来,比如酶活等。有荧光的话应该是有所表达的,但是并不能绝对确定是融合蛋白的准确表达。还是做一做免疫学实验鉴定一下吧。还要看你纯化这个蛋白要做什么,有很多实验并不需要很多蛋白的。
For my life!
4楼2009-03-04 15:38:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

还有,刚才忘了说,你应该检测一下是否有包涵体,就是将菌体超声破碎,10000G以上离心,比较离心前后的跑胶接过,看是否减少。离心后取上清。
For my life!
5楼2009-03-04 15:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +4 YangTyu1 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:17 by brand12388
[考研] 275求调剂 +9 Micky11223 2026-03-25 11/550 2026-03-26 15:54 by 不吃魚的貓
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-26 5/250 2026-03-26 13:33 by 邱gl
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +5 曼111 2026-03-24 6/300 2026-03-26 13:04 by 13756423260
[考研] 调剂310 +3 温柔的晚安 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:16 by peike
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分,求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 求调剂323材料与化工 +4 1124361 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:19 by shulmg
[考研] B区考研调剂 +4 yqdszhdap- 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:51 by baoball
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 石河子大学(211、双一流)硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
信息提示
请填处理意见