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mjl3680

木虫 (小有名气)

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专业: 微生物学

[交流] 求助前辈，有做过绿色荧光蛋白融合表达的吗

我是将一个疏水蛋白和绿色荧光蛋白融合表达，IPTG诱导后能看到菌体有绿色荧光，但全细胞跑SDS-PAGE，看不出表达蛋白的条带，不知道能看到绿色荧光是否说明这个融合表达的蛋白是可溶的，电泳检测不到，除了做WESTERN，还有什么别的方便办法，或者有谁做过原核表达的，给些建议，我的载体是PET30a+,宿主是BL21大肠杆菌。

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1楼 2009-03-03 21:59:26

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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

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专业: 生物化学

除了Western Blot以外，你还可以全菌包被做ELISA，但是除了免疫学检测的方法以外，应该没有什么很好的办法。除非你的蛋白有特殊的功能或者催化能力，你用相应的手段可以测出来，比如酶活等。有荧光的话应该是有所表达的，但是并不能绝对确定是融合蛋白的准确表达。还是做一做免疫学实验鉴定一下吧。还要看你纯化这个蛋白要做什么，有很多实验并不需要很多蛋白的。