应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助前辈，有做过绿色荧光蛋白融合表达的吗
71/1返回列表
查看: 593  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

mjl3680

木虫 (小有名气)

[交流] 求助前辈，有做过绿色荧光蛋白融合表达的吗

我是将一个疏水蛋白和绿色荧光蛋白融合表达，IPTG诱导后能看到菌体有绿色荧光，但全细胞跑SDS-PAGE，看不出表达蛋白的条带，不知道能看到绿色荧光是否说明这个融合表达的蛋白是可溶的，电泳检测不到，除了做WESTERN，还有什么别的方便办法，或者有谁做过原核表达的，给些建议，我的载体是PET30a+,宿主是BL21大肠杆菌。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-03-03 21:59:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

36678293

铜虫 (正式写手)
需要帮助吗，可以联系QQ:36678293,最低的价格，低的让你满意为止！
赞一下 回复此楼
2楼2009-03-04 00:27:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
能看到荧光是说明gfp有表达，但不能说明是可溶的，你全菌sdspage看不到表达条带可能是表达量很低，我觉得先试试看能不能提高表达量，比如低温诱导过夜之类的方法。能做WB当然是最好的啦。
赞一下 回复此楼
3楼2009-03-04 10:23:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
除了Western Blot以外，你还可以全菌包被做ELISA，但是除了免疫学检测的方法以外，应该没有什么很好的办法。除非你的蛋白有特殊的功能或者催化能力，你用相应的手段可以测出来，比如酶活等。有荧光的话应该是有所表达的，但是并不能绝对确定是融合蛋白的准确表达。还是做一做免疫学实验鉴定一下吧。还要看你纯化这个蛋白要做什么，有很多实验并不需要很多蛋白的。
赞一下 回复此楼
For my life！
4楼2009-03-04 15:38:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
还有，刚才忘了说，你应该检测一下是否有包涵体，就是将菌体超声破碎，10000G以上离心，比较离心前后的跑胶接过，看是否减少。离心后取上清。
赞一下 回复此楼
For my life！
5楼2009-03-04 15:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbyu007

木虫 (正式写手)
用基因枪转化，看GFP也不错！试试吧
赞一下 回复此楼
我是笨笨鱼~~~
6楼2009-03-04 16:44:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mjl3680

木虫 (小有名气)
我也是想通过提高表达量，先用电泳大致看一下表达蛋白的大小，低温，诱导时间加长，表达量增加，是从菌体沉淀发绿色看出来，但泡电泳不理想，因有组氨酸标签，过Ni柱结果也不好，不过我都是按可溶表达来处理。
  接下来我看看包涵体吧，大家对用NI柱纯化有什么经验可以教教我吗？
赞一下 回复此楼
7楼2009-03-06 17:49:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mjl3680 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +3 轩小宁—— 2026-03-26 3/150 2026-03-26 10:17 by JourneyLucky
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +3 丹青奶盖 2026-03-26 3/150 2026-03-26 10:06 by yeahyou
[考研] 材料调剂 5+3 想要一壶桃花水 2026-03-25 8/400 2026-03-26 09:51 by 王小欠i
[考研] 316求调剂 +9 梁茜雯 2026-03-19 9/450 2026-03-25 23:01 by peike
[考研] 308求调剂 +5 墨墨漠 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:19 by 544594351
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 315分，诚求调剂，材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭