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MAAAYUUU

新虫 (初入文坛)


[交流] 着急!!!!请问一下胶回收之后的产物想用Taq酶P加A 之后T链接!!!就是P不出来!!

着急!!!!请问一下胶回收之后的产物(还挺亮的)

之后想用Taq酶P加A 之后T链接!!!就是P不出来!!用的是EXtaq酶

请问有什么解决办法吗?????
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cosmos796

禁虫 (职业作家)


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2楼2017-12-23 21:16:20
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tableman

木虫之王 (文学泰斗)



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花开富贵   
6楼2017-12-23 22:35:14
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MAAAYUUU

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by cosmos796 at 2017-12-23 21:16:20
1.可以换全式金平末端的载体,我们一直都是这样的 2.加A尾PCR是否合适,PCR产物我以前是直接连载体,没有再回收也有做出来,不过最好用平末端载体简单

问题连条带也没有啊啊啊啊啊

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7楼2017-12-24 09:31:01
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cosmos796

禁虫 (职业作家)


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8楼2017-12-24 09:55:23
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MAAAYUUU

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
8楼: Originally posted by cosmos796 at 2017-12-24 09:55:23
P不出来的问题就多了,模板引物扩增条件,如果能有了正对照,就是已经做出来的,换酶或者模板试下
...

用高保真I5能P出来 但我现在是想加A连PMD-19 用Taq酶就P不出来

发自小木虫IOS客户端
9楼2017-12-24 10:02:43
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cosmos796

禁虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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10楼2017-12-24 10:15:57
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MAAAYUUU

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
10楼: Originally posted by cosmos796 at 2017-12-24 10:15:57
如果是这样,建议退火温度进行touch down or touch up,试一下这个

好的!感谢!我试试!

发自小木虫IOS客户端
11楼2017-12-24 12:17:07
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yuevis

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
要p吗,我买的pGEMT载体,说明书说只要加taq酶和buffer,70摄氏度,30min就可以用于t连接了

发自小木虫Android客户端
12楼2017-12-24 17:42:20
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ken19860823

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你是高保真酶先做的pcr吧,不用回收。pcr结束后加0.5ulextaq或者其他taq酶都行,然后再回收。

发自小木虫Android客户端
13楼2017-12-25 07:51:09
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didongwei

金虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般普通taq酶都有加A功能,不用额外再跑Pcr

发自小木虫IOS客户端
14楼2017-12-25 08:00:27
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rkgzd183楼
2017-12-23 22:01   回复  
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qgqmptj164楼
2017-12-23 22:19   回复  
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nono20095楼
2017-12-23 22:32   回复  
MAAAYUUU(金币+1): 谢谢参与
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