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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 着急！！！！请问一下胶回收之后的产物想用Taq酶P加A 之后T链接！！！就是P不出来！！
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MAAAYUUU

新虫 (初入文坛)

[交流] 着急！！！！请问一下胶回收之后的产物想用Taq酶P加A 之后T链接！！！就是P不出来！！

着急！！！！请问一下胶回收之后的产物（还挺亮的）

之后想用Taq酶P加A 之后T链接！！！就是P不出来！！用的是EXtaq酶

请问有什么解决办法吗？？？？？
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1楼 2017-12-23 21:02:08
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cosmos796

禁虫 (职业作家)
★
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2楼2017-12-23 21:16:20
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tableman

木虫之王 (文学泰斗)
★
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花开富贵   
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6楼2017-12-23 22:35:14
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MAAAYUUU

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cosmos796 at 2017-12-23 21:16:20
1.可以换全式金平末端的载体，我们一直都是这样的 2.加A尾PCR是否合适，PCR产物我以前是直接连载体，没有再回收也有做出来，不过最好用平末端载体简单

问题连条带也没有啊啊啊啊啊

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7楼2017-12-24 09:31:01
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cosmos796

禁虫 (职业作家)
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8楼2017-12-24 09:55:23
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MAAAYUUU

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cosmos796 at 2017-12-24 09:55:23
P不出来的问题就多了，模板引物扩增条件，如果能有了正对照，就是已经做出来的，换酶或者模板试下
...

用高保真I5能P出来 但我现在是想加A连PMD-19 用Taq酶就P不出来

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9楼2017-12-24 10:02:43
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cosmos796

禁虫 (职业作家)
★
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10楼2017-12-24 10:15:57
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MAAAYUUU

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cosmos796 at 2017-12-24 10:15:57
如果是这样，建议退火温度进行touch down or touch up，试一下这个

好的！感谢！我试试！

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11楼2017-12-24 12:17:07
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yuevis

铜虫 (小有名气)
★
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要p吗，我买的pGEMT载体，说明书说只要加taq酶和buffer，70摄氏度，30min就可以用于t连接了

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12楼2017-12-24 17:42:20
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ken19860823

木虫 (正式写手)
★
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你是高保真酶先做的pcr吧，不用回收。pcr结束后加0.5ulextaq或者其他taq酶都行，然后再回收。

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13楼2017-12-25 07:51:09
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didongwei

金虫 (著名写手)
★
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一般普通taq酶都有加A功能，不用额外再跑Pcr

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14楼2017-12-25 08:00:27
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rkgzd183楼
2017-12-23 22:01   回复  
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qgqmptj164楼
2017-12-23 22:19   回复  
MAAAYUUU(金币+1): 谢谢参与
nono20095楼
2017-12-23 22:32   回复  
MAAAYUUU(金币+1): 谢谢参与
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