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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR问题求助
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llgh-szwy

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR问题求助

最近在做两个基因及其截短的原核表达。
但是全长能够P出来截短无论如何也P不出
用过Ko的和Primer star两种酶
试过梯度和两步法，退火温度均在55度以上。

PCR问题求助
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1楼 2017-12-06 16:53:47
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竹叶水

银虫 (初入文坛)
模板量低吧，marker左边那个是全长的？亮度也不高啊，另外上样量是否少了点儿，循环次数是否少了一些？

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2楼2017-12-07 12:32:50
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llgh-szwy

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 竹叶水 at 2017-12-07 12:32:50
模板量低吧，marker左边那个是全长的？亮度也不高啊，另外上样量是否少了点儿，循环次数是否少了一些？

上样3μl，循32个循环，1μl的模板，这已经是产物再P了一次了。。。
请问还有什么别的可能吗。。？
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3楼2017-12-07 17:11:43
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learner_zyj

新虫 (小有名气)
引物合理吗？

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4楼2017-12-07 18:36:48
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匿名

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5楼2018-02-03 16:17:16
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★
drwhoknowss: 金币+1, 可行 2018-02-04 06:40:00
把全长扩增出来连到载体上测序，再以质粒为模板扩增呗。
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。
6楼2018-02-03 17:01:59
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程小花

新虫 (初入文坛)
全长如果测通过没问题的话，那也许是引物问题，酶的话用高保真的酶

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7楼2018-03-30 09:20:40
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