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llgh-szwy

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 216
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在线: 3.4小时
虫号: 4013537
注册: 2015-08-09
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] PCR问题求助

最近在做两个基因及其截短的原核表达。
但是全长能够P出来截短无论如何也P不出
用过Ko的和Primer star两种酶
试过梯度和两步法，退火温度均在55度以上。

[CYZUXYLI6R0`694DX1XGIN.png

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1楼 2017-12-06 16:53:47

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llgh-szwy

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 216
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虫号: 4013537
注册: 2015-08-09
专业: 生物大分子结构与功能

引用回帖:

2楼: Originally posted by 竹叶水 at 2017-12-07 12:32:50
模板量低吧，marker左边那个是全长的？亮度也不高啊，另外上样量是否少了点儿，循环次数是否少了一些？

上样3μl，循32个循环，1μl的模板，这已经是产物再P了一次了。。。
请问还有什么别的可能吗。。？

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3楼2017-12-07 17:11:43

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竹叶水

银虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 1074572
注册: 2010-08-14
专业: 临床分子生物学检验

模板量低吧，marker左边那个是全长的？亮度也不高啊，另外上样量是否少了点儿，循环次数是否少了一些？

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2楼2017-12-07 12:32:50

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

learner_zyj

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 4950973
注册: 2016-08-28
专业: 生物化学

引物合理吗？

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4楼2017-12-07 18:36:48

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匿名

应助: (幼儿园)
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虫号: 0

本帖仅楼主可见

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5楼2018-02-03 16:17:16

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