应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 求助，PEI转染悬浮细胞不成功，求帮助
52/1返回列表
查看: 3959  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

我叫崔温柔

新虫 (正式写手)

[求助] 求助，PEI转染悬浮细胞不成功，求帮助 已有3人参与

我用PEI转染悬浮293细胞
培养基用freestyle
转染前一天细胞计数1*10e6cells/ml，接种在125ml摇瓶中，总体积20ml
转染当天细胞密度为2*10e6cells/ml时转染，DNA、PEI分别用freestyle培养基稀释后，复合，静置10min后，加入到摇瓶中
转染48h后观察，没有荧光，一点儿都没有
希望有悬浮转染经验的虫友提供宝贵意见及建议
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-11-07 09:29:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡雅彬

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

换OPti-SFM稀释质粒和PEI试试。
赞一下 回复此楼
13楼2021-06-23 16:05:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

ywwabc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我没有使用过摇瓶转染，但是我估计的是你可以先把细胞密度调大，上清少一些转染4-6h后再补液，这样可以增大复合物与细胞接触的概率的啊！还有可能会不会是你的质粒本身不好表达呢？之前有转染成功过吗？
赞一下 回复此楼
2楼2017-11-07 17:09:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我叫崔温柔

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ywwabc at 2017-11-07 17:09:53
我没有使用过摇瓶转染，但是我估计的是你可以先把细胞密度调大，上清少一些转染4-6h后再补液，这样可以增大复合物与细胞接触的概率的啊！还有可能会不会是你的质粒本身不好表达呢？之前有转染成功过吗？

我用贴壁细胞做了对照，转染的很好，说明质粒与pei没有问题，我先加2.5*10e6cells/ml,10ml转染24个小时后，补加10ml，依旧没有荧光，，，，
文献中也是用的freestyle expression ，不知道问题出在了哪里
赞一下 回复此楼
3楼2017-11-07 17:17:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沧浪剑客

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以用这个CycloFect转染剂试试，这种转染剂的成功率高，而且毒性可以说当前这一代产品里最低的。
赞一下 回复此楼
Everymanshouldbehaveasagentleman.
4楼2017-11-07 18:28:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭