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溺水的十八鱼

银虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR(绝对定量) 已有1人参与

跪求大神指导:我在用染料法做荧光定量PCR(绝对定量)的时候,用稀释好的标准品做标准曲线,相邻两个梯度的标准品的扩增循环数达不到3.3,总是1点几个循环,曲线斜率是-1.5左右,达不到-3,怎么解决这个问题啊?
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许彦

木虫 (正式写手)

2楼2017-11-06 12:41:27
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溺水的十八鱼

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 许彦 at 2017-11-06 16:41:27
没有稀释好吗?

稀释好了,我用我师兄的标准品做就没有问题,我自己的就不行

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3楼2017-11-06 14:35:08
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樱花祭

新虫 (小有名气)

想请教下,标准品是什么

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4楼2017-11-08 13:21:32
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溺水的十八鱼

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 樱花祭 at 2017-11-08 17:21:32
想请教下,标准品是什么

插入目的基因片段的质粒,也可以是基因组DNA

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-11-08 14:13:18
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lenaimiao

金虫 (正式写手)

你自己标准品的质量如何?反应条件有没有变化?

发自小木虫Android客户端
6楼2017-11-11 17:25:15
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许彦

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 溺水的十八鱼 at 2017-11-06 14:35:08
稀释好了,我用我师兄的标准品做就没有问题,我自己的就不行
...

你用师兄的标准品做没问题,你的有问题不就是你的没有稀释好吗

发自小木虫IOS客户端
7楼2017-11-16 12:21:51
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量,绝对定量不同于相对定量,我们是验室用BIOG 技术做PCR实验,做下来扩增曲线的起跳值在28左右,算是不错的数据了
8楼2019-12-16 10:43:51
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