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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR（绝对定量）
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溺水的十八鱼

银虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR（绝对定量）已有1人参与

跪求大神指导：我在用染料法做荧光定量PCR（绝对定量）的时候，用稀释好的标准品做标准曲线，相邻两个梯度的标准品的扩增循环数达不到3.3，总是1点几个循环，曲线斜率是-1.5左右，达不到-3，怎么解决这个问题啊？
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1楼2017-11-06 10:35:40
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许彦

木虫 (正式写手)
没有稀释好吗？

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2楼2017-11-06 12:41:27
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溺水的十八鱼

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 许彦 at 2017-11-06 16:41:27
没有稀释好吗？

稀释好了，我用我师兄的标准品做就没有问题，我自己的就不行

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3楼2017-11-06 14:35:08
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樱花祭

新虫 (小有名气)
想请教下，标准品是什么

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4楼2017-11-08 13:21:32
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溺水的十八鱼

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 樱花祭 at 2017-11-08 17:21:32
想请教下，标准品是什么

插入目的基因片段的质粒，也可以是基因组DNA

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5楼2017-11-08 14:13:18
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lenaimiao

金虫 (正式写手)
你自己标准品的质量如何？反应条件有没有变化？

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6楼2017-11-11 17:25:15
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许彦

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 溺水的十八鱼 at 2017-11-06 14:35:08
稀释好了，我用我师兄的标准品做就没有问题，我自己的就不行
...

你用师兄的标准品做没问题，你的有问题不就是你的没有稀释好吗

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7楼2017-11-16 12:21:51
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量，绝对定量不同于相对定量，我们是验室用BIOG 技术做PCR实验，做下来扩增曲线的起跳值在28左右，算是不错的数据了
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8楼2019-12-16 10:43:51
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