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halobsunny1

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助!关于DPPC脂质体的粒径问题已有2人参与

最近用DPPC制备脂质体,用的是薄膜水化法,PBS水化,然后探头100w功率超声10分钟,超声完后变得澄清,然后在55度的烘箱里(除了烘箱没有别的升温设备了,实验室里的水浴锅太小了)过100nm的聚碳酸酯膜21次,过的时候还挺好过的,制备好后用DLS的方法测粒径,是用马尔文粒径仪,结果测出来最好一次粒径也有240nm左右,昨天测的更是离谱,探头超声变得澄清后,测粒径居然有800nm,还出现了2个分布峰,如图所示,DPPC我看挺多人做的,但是我按照文献里做怎么都做不出来100nm的效果,已经摸索了一个月的条件了。以前还用SPC做过脂质体,SPC相变温度低,很容易就得到100多nm的结果。
DPPC是不是因为相变温度太高,所以过膜后温度回到常温分子就从液晶态转变为凝胶态了,于是又聚集起来了?如何控制DPPC的粒径呢?加入胆固醇会不会好一点?
求助啊,真要被这个逼疯了

求助!关于DPPC脂质体的粒径问题
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空心大萝卜

木虫 (小有名气)

闲散人员

【答案】应助回帖

一般过了100nm的聚碳酸酯膜之后,基本上就是100nm左右了,你测出来粒径这么大,很可能是测粒径的仪器设置是不对的,测不同的物质,仪器对对池子还有一个什么偏角都是有不同的要求的,你可以问一下管仪器的老师或者看一下说明书
敛于心,展于行
6楼2017-11-14 22:10:42
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halobsunny1

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by DENTIST素 at 2017-11-11 17:01:04
请问你的100瓦功率有文献支持吗,可以发一下题目吗

我是在一本书里看到的
求助!关于DPPC脂质体的粒径问题-1


求助!关于DPPC脂质体的粒径问题-2



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8楼2017-11-15 17:00:07
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halobsunny1

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 空心大萝卜 at 2017-11-14 22:10:42
一般过了100nm的聚碳酸酯膜之后,基本上就是100nm左右了,你测出来粒径这么大,很可能是测粒径的仪器设置是不对的,测不同的物质,仪器对对池子还有一个什么偏角都是有不同的要求的,你可以问一下管仪器的老师或者看 ...

谢谢你的解答,我最后用dppc实在做不出来,于是换了相变温度低的popc初始粒径还挺小的,但又有一个问题就是用马尔文测的时候重复四次,主要看peak1.的值,测的结果可能差的挺大,比如四次结果是162 172 145 165这样,是不是因为我的脂质体不稳定啊?_(:з」∠)_

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9楼2017-11-15 17:05:37
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空心大萝卜

木虫 (小有名气)

闲散人员

引用回帖:
9楼: Originally posted by halobsunny1 at 2017-11-15 17:05:37
谢谢你的解答,我最后用dppc实在做不出来,于是换了相变温度低的popc初始粒径还挺小的,但又有一个问题就是用马尔文测的时候重复四次,主要看peak1.的值,测的结果可能差的挺大,比如四次结果是162 172 145 165这样 ...

DPPC的相转变温度是41度,所以挤出的时候要把挤出的那个设备加热,同时挤出,要不然DPPC都处于另外一个相,所以挤不动
敛于心,展于行
11楼2017-12-14 21:11:04
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halobsunny1

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 青青白白123 at 2017-12-14 10:52:29
请问怎么在膜里加胆固醇呢?
...

就是称磷脂的时候加入胆固醇啊,然后加有机溶剂旋蒸成膜就好了

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13楼2017-12-20 14:28:18
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halobsunny1

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 莫落 at 2017-12-27 17:46:23
你好!请问磷脂POPC怎么才能制备脂质体啊?我用液氮冻融,超声,都形成不了透明的溶液,离心后还是全部沉下去了。大神有经验吗?还麻烦指导一二...

不好意思现在才看到,这种纯脂质体本来稳定性就不太好,确实很容易沉,我们实验室的制备是水化之后,水浴超声,然后过100nm膜21次,再定容到100毫升,配出来的溶液也不是透明的,除非你用探头一开始就把它超声到透明,那个时候粒径很小了,后面配成溶液就能透明,但是我不建议你把它用探头超声到透明,因为会把脂质体超声超得太碎,粒径分布可能会有双峰,而且探头的金属钛屑还会污染脂质体

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15楼2018-01-09 11:37:13
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halobsunny1

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by hua1993921 at 2017-12-15 12:36:43
请问,你的脂质体是用PBS水化的吗?那仪器设置的参数和水的相同吗?我用薄膜分散法制备的SPC、EPC脂质体PDI为1,电位在-17mv,但没有电位图是怎么回事?我测电位时没有稀释,取得是上部溶。...

是用pbs溶,测粒径溶剂选水,溶质选蛋白质,你的pdi值最好要小于0.3,我测电位的时候也没有分布曲线图,我们是只要电位的值就好了,只要求看一个大致的规律,所以对我来说没啥影响

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16楼2018-01-09 11:42:41
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xiaom_uchong

木虫 (著名写手)

这张图的粒径偏小,你的实际值不低于五百

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2楼2017-11-01 22:16:17
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halobsunny1

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaom_uchong at 2017-11-01 22:16:17
这张图的粒径偏小,你的实际值不低于五百

是啊所以到底该怎么样让dppc的粒径在100nm左右啊每天挤脂质体挤得要吐了

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3楼2017-11-01 22:20:19
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曼达林

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我加了胆固醇做的,也是用的薄膜水化法,粒径100nm左右,挤出的时候我还用了50nm的滤膜挤出
4楼2017-11-09 15:39:27
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DENTIST素

新虫 (初入文坛)

请问你的100瓦功率有文献支持吗,可以发一下题目吗

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5楼2017-11-11 17:01:04
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halobsunny1

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 曼达林 at 2017-11-09 15:39:27
我加了胆固醇做的,也是用的薄膜水化法,粒径100nm左右,挤出的时候我还用了50nm的滤膜挤出

是dppc和胆固醇吗?我们实验室里只有100nm的膜,而且dppc在常温下根本挤不动

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7楼2017-11-15 16:58:46
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青青白白123

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 曼达林 at 2017-11-09 15:39:27
我加了胆固醇做的,也是用的薄膜水化法,粒径100nm左右,挤出的时候我还用了50nm的滤膜挤出

请问怎么在膜里加胆固醇呢?

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10楼2017-12-14 10:52:29
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