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NEB酶切产物纯化回收率很低
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当质粒进行单酶切或者只切除很小的片段时，我会直接使用PCR清洁试剂盒对酶切产物进行柱回收。 在原来实验室，我用的TAKARA的内切酶和Axygen的PCR清洁试剂盒，回收率很高，一般>80%. 最近换了实验室，现在使用NEB的内切酶，酶切产物我试过生工和Axygen清洁试剂盒来回收，但是效率都很低，不超过20%。 我试过加入多倍的高盐低pH缓冲液，挂柱子时低速离心，wash buffer（已加乙醇）洗脱后空离，加热洗脱液，EB buffer或ddH2O润湿硅胶柱后静置再离心，等方法，但回收率并没有明显的提高。 PCR清洁试剂盒质量没有问题，回收PCR产物时，回收率很高。 这个是NEB的Cutsmart buffer 的成分，我觉得也没有什么特别的地方，很不理解为什么回收率会这么低。不知大家是否有遇到类似状况，是如何解决的呢？谢谢 50 mM Potassium Acetate 20 mM Tris-acetate 10 mM Magnesium Acetate 100 μg/ml BSA pH 7.9@25°C |
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23楼2017-11-02 20:33:58
3楼2017-10-28 23:01:19
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7楼2017-10-28 23:24:18
18楼2017-10-31 21:38:47
22楼2017-11-02 15:59:51
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nono20092楼
2017-10-28 23:00
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2017-10-28 23:17
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远方的游子6126楼
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M塞北8楼
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syhorchid11楼
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spc0812楼
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tpw12313楼
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sz_kebaoyuan16楼
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nono200917楼
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sz_kebaoyuan19楼
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龙老师征稿20楼
2017-11-01 11:48
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bj200898921楼
2017-11-01 19:28
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