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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 分子生物学新手求助
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Apathy123

银虫 (初入文坛)

[求助] 分子生物学新手求助 已有1人参与

求助大神，最近一直连接克隆载体连接不出来，每次测序都是空载。明明pcr都能P出目的条带，但是测序就是空载。P的基因测序有错配，怎么避免呢，新手刚开始做有点乱，不知道要买哪家的酶好，之前买了Takara的primeStar用了之后跑电泳还没有全式金的easytaq mix条带亮，但是感觉mix保真效果不好，我现在很茫然，不知道接下来怎么做，求助各位大神

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1楼 2017-10-23 20:25:15
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莫落

木虫 (正式写手)
用phusion

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2楼2017-10-23 21:30:04
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卡卡罗特zxg

金虫 (小有名气)
max保真性足够了   我用他连接都可以

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3楼2017-10-24 09:28:10
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didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
高保真酶对模板要求比较高，你可以先用LA_Taq先扩增五个循环，再以此为模板用高保真酶扩增……至于是空载体，如果用的酶切连接法，考虑是不是内切或者连接那部分有问题……

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不是优秀，而是不可替代
4楼2017-10-24 12:10:50
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