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Apathy123

银虫 (初入文坛)

[求助] 分子生物学新手求助 已有1人参与

求助大神,最近一直连接克隆载体连接不出来,每次测序都是空载。明明pcr都能P出目的条带,但是测序就是空载。P的基因测序有错配,怎么避免呢,新手刚开始做有点乱,不知道要买哪家的酶好,之前买了Takara的primeStar用了之后跑电泳还没有全式金的easytaq mix条带亮,但是感觉mix保真效果不好,我现在很茫然,不知道接下来怎么做,求助各位大神

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莫落

木虫 (正式写手)

2楼2017-10-23 21:30:04
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卡卡罗特zxg

金虫 (小有名气)

max保真性足够了   我用他连接都可以

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3楼2017-10-24 09:28:10
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didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
高保真酶对模板要求比较高,你可以先用LA_Taq先扩增五个循环,再以此为模板用高保真酶扩增……至于是空载体,如果用的酶切连接法,考虑是不是内切或者连接那部分有问题……

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不是优秀,而是不可替代
4楼2017-10-24 12:10:50
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