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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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白浅2009

铁虫 (小有名气)

[求助] ELISA结果分析 已有4人参与

用的试剂盒测的血小板球蛋白,标准曲线做出来是线性的,样品稀释了不同梯度,但是OD值差不都,刚接触ELISA不明白实验哪出了问题 求大神解答

ELISA结果分析


ELISA结果分析-1


ELISA结果分析-2


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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
试剂盒的灵敏程度不够,样品的浓度估计不高,样品的成分估计有一定的干扰抑制的作用。你需要找个高灵敏的试剂盒,将样品稀释倍数增加到10倍以上,到时候估计稀释倍数和检测的浓度值能够比较吻合。好的ELISA试剂盒应该能够将定量下限推导500pg一下
8楼2017-10-13 11:49:53
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白浅2009

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 残月canyue at 2017-10-12 22:12:35
本身太浓了?稀释的不够?

问了厂家,说是原液的值测得差不多啊,应该不是稀释不够的问题

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4楼2017-10-13 08:35:23
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卡拉果胶

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人感觉吸光度这个东西,在均匀的体系里面相对准一点,怕不是样品本身在稀释的时候均一性不够?
6楼2017-10-13 11:15:17
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卡拉果胶

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 白浅2009 at 2017-10-13 11:42:48
稀释完都用枪混匀了几次,这样还不行么
...

我说的均一性,是指是否有悬浊之类的,你稀释的话也混不匀。

个人比较同意八楼的观点。看看你的标准曲线:原液浓度在第二和第三点之间。假定标准曲线上第一个点即12.5为准确可测点,你稀释3倍,理论上约为13左右,在第一个点附近,稀释6倍,在6.5左右,低于第一个点,可以认为测不准。 综上,该浓度下,稀释没多大意义。
11楼2017-10-13 15:13:18
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白浅2009

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 卡拉果胶 at 2017-10-13 15:13:18
我说的均一性,是指是否有悬浊之类的,你稀释的话也混不匀。

个人比较同意八楼的观点。看看你的标准曲线:原液浓度在第二和第三点之间。假定标准曲线上第一个点即12.5为准确可测点,你稀释3倍,理论上约为13左右 ...

哦哦,样品好像不均一

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12楼2017-10-13 16:16:53
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soarshining

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

血浆一般不会影响elisa的测定,我们平时只有做血浆酶学活性分析才会用血清。个人觉得最大的可能是kit本身特异性不佳,可以买个小包装的millipore或者roche、sigma之类试一试。国产的kit,个人觉得仅仅用于临床的kit算是比较靠谱的。

因为你原液的吸光度本身就不高,一般不会是太浓,而是灵敏度太差。虽然是线性的,但你看你的测量结果只在前三个点范围内,那三个点才占多少比例?连1/5都没。还得往下稀释,可能这时候测出来的都是杂蛋白了。
13楼2018-01-03 12:51:53
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普通回帖

残月canyue

木虫 (著名写手)

本身太浓了?稀释的不够?

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平静、平凡、平淡
2楼2017-10-12 22:12:35
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chenllili

铜虫 (正式写手)

稀释倍数提高,10倍,。。。100倍,200倍,400倍

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3楼2017-10-13 00:36:25
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白浅2009

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chenllili at 2017-10-13 00:36:25
稀释倍数提高,10倍,。。。100倍,200倍,400倍

正常值也就30ng/ml左右,和我测得原液差不多

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5楼2017-10-13 08:36:31
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白浅2009

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 卡拉果胶 at 2017-10-13 11:15:17
个人感觉吸光度这个东西,在均匀的体系里面相对准一点,怕不是样品本身在稀释的时候均一性不够?

稀释完都用枪混匀了几次,这样还不行么

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7楼2017-10-13 11:42:48
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白浅2009

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yyy0305 at 2017-10-13 11:49:53
试剂盒的灵敏程度不够,样品的浓度估计不高,样品的成分估计有一定的干扰抑制的作用。你需要找个高灵敏的试剂盒,将样品稀释倍数增加到10倍以上,到时候估计稀释倍数和检测的浓度值能够比较吻合。好的ELISA试剂盒应 ...

那用血清检测是不是会比血浆好点

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9楼2017-10-13 12:48:53
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 白浅2009 at 2017-10-13 12:48:53
那用血清检测是不是会比血浆好点
...

如果样品足够的话,你可以尝试一下,我没有这块的直接经验
10楼2017-10-13 12:54:40
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