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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RACR扩未知序列
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famgy

新虫 (初入文坛)

[求助] RACR扩未知序列 已有2人参与

我正在做5'3'RACE，得到的片段胶回收后条带是可以的，菌液pcr也是正常的，但是测序回来的序列重叠区匹配不上，我填写的测序单是测通，没有填片段大小（有说可能是我没有填片段大小测序测的片段错了）。想问下大家做RACE时怎么填测序单的，还是我的实验需要注意其他的事项，感谢，感谢～～

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1楼 2017-10-11 23:19:10
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-10-15 07:49:52
RACE时怎么填测序单：
首先 上栏  自己的名字 邮箱  电话
下面  
样品名；
样品类型（菌液，质粒，PCR产物（是否纯化）等）；
引物（如果是菌液或质粒填了质粒名字就行，如果是PCR产物需要你自己提供PCR引物） ；
片段长度就是你想测的长度；
单向双向，是否测桶取决于你的目的，如果测全长最好双向测通，如果只是验证可以只测单向的一个反应
其它的抗性可以选填，如果写了质粒名字不填一般他们也知道。
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及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-10-12 08:05:52
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famgy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-10-12 08:05:52
RACE时怎么填测序单：
首先 上栏  自己的名字 邮箱  电话
下面  
样品名；
样品类型（菌液，质粒，PCR产物（是否纯化）等）；
引物（如果是菌液或质粒填了质粒名字就行，如果是PCR产物需要你自己提供PCR引物 ...

我的条带在实验过程都是正常的，就是测序回来的结果跟我的条带一点也不对。所以还在找原因。

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3楼2017-10-14 18:50:05
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吴美儒

新虫 (小有名气)
我也是的，扩了好几次了

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4楼2017-11-19 17:38:53
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lulu318

铜虫 (初入文坛)
您好。我最近也在做RACE，楼主方便交流一下吗
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5楼2018-01-04 10:56:52
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ayfly

铁虫 (初入文坛)
楼主，您好！请问你最近有什么进展么，我也是和你一样的情况，我已经做了很久了，总是扩不出来，每次也是有条带，但是测序结果总是比对不上。。。
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6楼2018-01-10 20:33:51
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cmjll

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by famgy at 2017-10-14 18:50:05
我的条带在实验过程都是正常的，就是测序回来的结果跟我的条带一点也不对。所以还在找原因。
...

测出来得到的有可能是载体序列，建议与载体序列比对一下
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7楼2018-03-12 21:34:25
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ljourney

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cmjll at 2018-03-12 21:34:25
测出来得到的有可能是载体序列，建议与载体序列比对一下...

你好，我的也是做了好几遍了，没有连在载体上，5'端完整所以直接用5'端设计的上游引物扩的，程序是touchdown，跑胶有条带，但是不单一，然后所有比较明亮的条带都切胶回收再扩增，总共扩了三轮，都是用Q5酶扩的，但是三轮的胶回收产物都送去测序了都不对，不知道为什么。。操作应该是没有问题的啊。。

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8楼2018-03-20 15:22:21
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ljourney

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ayfly at 2018-01-10 20:33:51
楼主，您好！请问你最近有什么进展么，我也是和你一样的情况，我已经做了很久了，总是扩不出来，每次也是有条带，但是测序结果总是比对不上。。。

我也是同样的情况，请问你最近有做出来了么？

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9楼2018-03-20 15:23:19
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Anna Chen

新虫 (小有名气)
那就是引物不对，扩增出来非特异性条带了吧
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10楼2018-03-23 10:05:26
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